PPARγ、脂联素对肝纤维化的影响

发布时间：2020-04-28 11:51

【摘要】：目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体（γPPARγ）对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）生物学特性、脂联素表达的影响及其抗肝纤维化作用，为PPARγ抗肝纤维化的临床运用提供实验依据。方法：将大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)用含10%胎牛血清（FBS）的高糖DMEM培养液培养至贴壁，经血清饥饿同步24小时，分成4个组，即：空白对照组（用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养液培养）；罗格列酮（10μmol/L）刺激组；GW9662(1μmol/L)阻断组；罗格列酮+GW9662组：（10μmol/L罗格列酮+1μmol/LGW9662）。四组分别培养24小时后，①四甲基偶氮唑盐比色实验（MTT）检测各组细胞的增殖情况；②ELISA方法分别检测细胞培养上清液中的脂联素（Adiponectin）、I型胶原、基质金属蛋白酶2(MMP2)及基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP2)的含量；③RT-PCR半定量检测脂联素及PPARγ mRNA表达；④Westernblot方法检测脂联素及PPARγ蛋白表达。结果：1、MTT实验结果显示罗格列酮组的肝星状细胞增殖率较其他组明显减弱（P＜0.01）；2、ELISA结果发现罗格列酮组I型胶原及MMP2的表达量较罗格列酮+GW9662组、GW9662组、空白对照组明显下降（P＜0.01）；罗格列酮组脂联素及TIMP2的表达量较其他三组明显升高（P＜0.01）；3、RT-PCR结果显示罗格列酮组脂联素、PPARγ mRNA的表达较罗格列酮+GW9662组、GW9662组、空白对照组明显升高（P＜0.01）；且脂联素和PPARγmRNA表达存在显著相关关系（相关指数为0.970，P=0.000，P0.01）。4、Western blot结果显示罗格列酮组脂联素、PPARγ蛋白的含量显著高于罗格列酮+GW9662组、GW9662组及空白对照组（P＜0.01）；且脂联素和PPARγ蛋白表达存在显著相关关系（相关指数为0.966，P=0.001，P0.01）。结论：PPARγ特异性激动剂罗格列酮可以抑制HSC增殖，下调I型胶原及MMP2的表达，上调脂联素、PPARγ及TIMP2的表达，增加细胞外基质的降解，达到抗肝纤维化的作用。PPARγ特异性激动剂罗格列酮对HSC脂联素、PPARγ的表达影响具有相关性。
【图文】：

图 1 ELISA 检测 HSC-T6 细胞脂联素、I 型胶原、MMP2、TIMP2 含量的变化2.3.3 RT-PCR 检测 HSC-T6 细胞脂联素和 PPARγ 的 mRNA 表达的变化RT-PCR 结果显示：①罗格列酮组脂联素 mRNA 相对表达量为 1.273±0.04较 GW9662 组、GW9662 加罗格列酮组、空白对照组（0.653±0.075、0.633±0.090.693±0.065）明显升高，差异有统计学意义(t 值分别为 12.264、10.733、12.69P<0.01)。②罗格列酮组 PPARγmRNA 相对表达量为 1.633±0.015，较 GW96组、GW9662 加罗格列酮组、空白对照组（0.403±0.015、0.450±0.026、0.457±0.01明显升高，差异有统计学意义(t 值分别为 8.619、7.089、4.343，P<0.01)。③它各组脂联素、PPARγ mRNA 相对表达量无明显差异（P>0.05）。④GW9662断罗格列酮对 PPARγmRNA 表达同时，也阻断了罗格列酮对脂联素 mRNA 的达。⑤脂联素和 PPARγmRNA 表达存在显著正相关关系（相关指数为 0.970P=0.000，P<0.01）。（见表 6，，图 2、3）

RT-PCR检测HSC-T6细胞脂联素、PPARγmRNA表达的影响
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R575.2

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本文编号：2643430