一种简便高效的大鼠胰腺腺泡细胞的体外分离培养方法及其对细胞功能的影响

发布时间：2020-05-04 23:46

【摘要】：目的:探索简便、高效和稳定的胰腺腺泡分离、纯化的新方法,并进行培养和形态学观察,探讨不同方法对细胞功能的影响。 方法:18只SD大鼠随机分成改进方法组和传统方法(内灌注法)组,戊巴比妥腹腔麻醉后,改进方法组采用改进方法迅速切取并剪碎胰腺组织后置于新鲜配制的细胞分离液中,置入旋转水浴槽37℃,120r/min搅动20分钟消化沉降,过滤获得细胞悬液,D-Hanks液(不含钙离子的Hanks液)清洗后获得胰腺腺泡细胞,离心收集后培养;传统方法组采用内灌注法获取胰腺腺泡细胞。然后进行形态学观察、细胞计数、细胞存活率测定、纯度鉴定、细胞内钙离子及胰腺腺泡细胞培养上清液中淀粉酶测定。 结果:两种方法分离新鲜的大鼠胰腺腺泡细胞镜下均呈葡萄样聚集,单个胰腺细胞呈球形,少量细胞形状不规则,培养数4小时后细胞分散均相对均匀。电镜下新鲜分离的细胞可见胰腺腺泡细胞典型超微结构,大量的酶原颗粒(zymogen granules,Z)和丰富的粗面内质网(endoplasmic reticulum,RER);培养12h后虽然可见酶原颗粒减少,但仍然可见大量的酶原颗粒和粗面内质网;在培养的腺泡细胞内可见一些细胞器的微小碎片。改进方法所获得的胰腺腺泡产率(细胞数量)为(5.0±0.27)×10~6/g胰腺,纯度为(81.11±2.15)%,与传统方法所获得的胰腺腺泡数量(4.8±0.49)×10~6/g胰腺,纯度(80.89±3.98)%相比较无统计学意义( P0.05);而细胞存活率为(91.33±1.80)%显著高于传统方法(83.56±4.69)%,(P0.05);细胞内钙离子浓度为(3.71±0.42)μmol/L显著低于传统方法组(5.29±0.30)μmol/L,( P0.05 );改进法所获得的胰腺腺泡细胞培养上清液中淀粉酶在培养后1h、4h、10h的含量分别为(315.65±15.65)U/L、(836.84±52.69)U/L、(1621.25±158.58)U/L,显著高于传统方法同时间点(283.92±19.45)U/L、(621.71±42.34)U/L、(1406.06±151.38)U/L的含量(P0.05)。 结论:改进方法是一种简便、稳定、高效且对细胞活力及外分泌功能影响较小的胰腺腺泡细胞分离提纯方法。
【图文】：

图 5 分离后 2h 大鼠胰腺腺泡细胞(x40) 图 6 分离后 10h 分散开的大鼠胰腺腺泡细胞(x40)FIG.5. Rat acinar cells after 2 hours that be isolated (x40). FIG. 6. Rat acinar cellsafter 10 hours that be isolated (x40).

图 8 分离 12h 后的胰腺腺泡细胞 ×6700（电子显微镜）。蓝色箭头所示为酶原颗粒。红色箭头所示为粗面内质网。黑色箭头所示为细胞器微小碎片。FIG. 8. Cultured pancreatic acinar cell. ×6700 . Electron micrograph of pancreaticacinar cells cultured for12h. Blue arrowhead indicates zymogen granule. Redarrowhead indicates rough endoplasmic reticulum. Black arrowhead indicates cellular
【学位授予单位】：广东药学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R576

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本文编号：2649167