脱落乳牙牙髓干细胞治疗小鼠自身免疫性肝炎的研究

发布时间：2020-05-05 16:25

【摘要】：背景和目的:自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)是一种由免疫介导的肝脏炎症性疾病,可以急性或慢性形式存在。AIH临床表现多种多样,可隐匿起病无任何症状,也可急性起病甚至表现为急性肝衰竭。目前临床上治疗AIH的方法主要是单独使用糖皮质激素或联合免疫抑制剂硫唑嘌呤,这种方法需要长期服用药物,并且容易产生副作用,且完全缓解率并不高,因此迫切需要寻找和探讨新的有效治疗方法。脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous tooth,SHED)组织来源丰富、容易获取、无创伤、具有较低的免疫排斥反应。大量动物实验和临床研究证实SHED对多种自身免疫性疾病都有较好的治疗效果。本研究采用SHED对刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠自身免疫性肝炎进行干预,并评估SHED的治疗效果及其机制。方法:体外培养SHED并鉴定其增殖能力和多向分化能力。C57BL/6小鼠随机分为三组,每组5只:正常对照组(Control)、自身免疫性肝炎组(Con A)和治疗组(SHED+ConA)。ConA诱导24h后,收集各组小鼠肝脏组织和外周血。采用ELISA法检测小鼠外周血TNF-α和IFN-γ炎症因子的水平,并检测外周血谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的水平。进行肝脏Knodell评分。分离的肝脏组织通过HE染色和免疫组化染色对其进行组织学分析。结果:1、SHED具有较强的自我增殖能力。茜素红染色和油红O染色均呈阳性,表明SHED具有自我增殖、多向分化能力。2、ConA组小鼠血清ALT和AST以及Knodell评分均较Control组显著升高,SHED+ConA组ALT、AST和Knodell评分均较ConA组显著下降,差异具有统计学意义。3、ConA组小鼠血清及肝脏组织内炎症因子TNF-α和IFN-γ的表达水平较Control组显著升高,SHED+ConA组较ConA组显著下降,差异具有统计学意义。4、ConA组小鼠肝脏组织内CD3~+和CD4~+T细胞表达水平较Control组显著升高,SHED+ConA组较ConA组显著下降,差异具有统计学意义。5、ConA组小鼠肝脏组织内NF-κB的表达水平较Control组显著升高,SHED+ConA组较ConA组显著下降,差异具有统计学意义。结论:1、SHED体外培养具有较强的自我增殖能力,并具有成骨、成脂多向分化能力。2、SHED对ConA诱导的小鼠自身免疫性肝炎具有治疗作用。3、SHED可以抑制ConA诱导的小鼠肝脏内CD3~+和CD4~+T细胞的活化,减少Th1细胞分泌炎症因子TNF-α和IFN-γ,缓解肝脏损伤。4、SHED通过阻断NF-κB信号通路,抑制炎症因子TNF-α和IFN-γ的表达,缓解肝脏损伤。
【图文】：

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3 尾静脉注射 SHED 治疗 ConA 诱导的小鼠自身免疫性肝炎第零天注射 SHED 1×106（SHED+ConA 组）和生理盐水（Co注射 ConA 15mg/Kg，二十四小时后处死，收集血浆和肝脏标本验性自身免疫性肝炎模型的建立方法参考 Zhu[25]等人的验在北京大学口腔医学院动物实验中心通过细菌检测养在温度（22℃）和湿度（55%）适宜的环境中，同时周期检测，关灯时间为晚上 7:00。动物实验方法通过了会审查并符合其标准。（LA2013-92）BL/6 雌性小鼠随机分为三组，即正常对照组（Control）Con A）和治疗组（SHED+ConA），每组 5 只。饲养一组于实验开始第 0 天，小鼠在麻醉下，通过尾静脉注射始第 7 天，治疗组和自身免疫性肝炎组小鼠于麻醉下，溶液，注射剂量为 15mg/kg。静脉注射 ConA 24h 后观察各组小鼠状态，于 1%戊巴比

能力检测,光镜,形态,多角形

图 4 SHED 光镜下的形态及自我增殖能力检测镜下观察 SHED 贴壁成长，，呈长梭形和多角形；B，CCK-8 法检测显示 SHE强的自我增殖能力。标尺=500μm。将 SHED 接种于 10cm 的培养皿，放入细胞培养箱中培养，4 小时后贴壁生长，光镜下显示细胞成长梭形和多角形（图 4A）。细胞呈指 4B），细胞形态一致，呈长梭形。SHED 多向分化能力
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R575.1

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