UCP-2在软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗中的作用及机制探讨

发布时间：2020-05-07 07:56

【摘要】： 目的: 1、探讨UCP-2在软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗中的表达及其作用。 2、探讨UCP-2在软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗中的作用机制。 方法: 1.用含10%胎牛血清的1640培养基培养HepG2细胞,并进行常规传代。 2、实验设立正常对照组、高胰岛素组、软脂酸组(PA组)和干预组。 3、检测细胞培养液中与胰岛素抵抗及脂变相关的一些指标:葡萄糖、SOD、MDA、GGT、TG、ALT、ASL,油红O鉴定HepG2细胞脂肪变性情况,流式细胞术(FCM)检测细胞膜电位变化,RT-PCR、Western Blot检测UCP-2、IRS-2、PI-3K、NF-κBmRNA及蛋白水平表达变化。 结果: 1、HepG2细胞的胰岛素抵抗体外模型建立成功 用葡萄糖氧化酶法检测细胞培养液中葡萄糖浓度,软脂酸组葡萄糖浓度和高胰岛素组无统计学差异(P0.05),表明用软脂酸诱导HepG2细胞的胰岛素抵抗体外模型成功建立。 2.对照组、软脂酸组、干预组的ALT、AST、TG,GGT的变化 软脂酸组ALT、AST、TG,GGT水平明显高于其他两组(P0.05),且有统计学意义,其他两组无明显差异,无统计学意义(P0.05)。 3.油红O染色观察各组细胞脂肪变性情况 对照组和干预组细胞内可见少量橘红色脂滴,软脂酸组细胞内可见大量明显脂滴。 4.流式细胞术检测细胞线粒体膜电位变化 软脂酸组(PA组)膜电位降低,低于对照组和干预组,且有统计学意义(P0.05)。 5.各组UCP-2、IRS-2、PI-3K、NF-κBmRNA及蛋白表达的变化。 与对照组和干预组相比,软脂酸组UCP-2、NF-κB蛋白表达明显升高(P0.05),IRS-2、PI-3K则软脂酸组明显低于对照组和干预组(P0.05),各组的mRNA表达水平随蛋白同步升高或降低。 结论: 1、软脂酸在体外成功诱导了HepG2细胞发生胰岛素抵抗,同时发生了脂肪变性。 2、UCP2表达升高使线粒体膜电位降低,加重了细胞损害,加入抑制剂京尼平后,得到明显改善。 3、通过检测和胰岛素信号传导通路相关的IRS-2、PI3K的表达水平,在PA组二者均降低,加入UCP-2抑制剂京尼平后,二者表达升高,提示UCP-2在肝脏胰岛素抵抗中起着重要作用,其机制可能和肝脏胰岛素抵抗的信号传导通路障碍有关。
【图文】：

图 2 软脂酸诱导 HepG2 细胞膜电位水平的变化Fig 2 Changs in mitochondriai membrane potential of HepG2 cell induced b: A :Control group; B: P A group; C: Intervention groupβ-actin GAPDH PI3K

各组UCP-2、IRS-2、及NF-κBmRNA表达变化
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R575.5

【参考文献】

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4 张智慧;张梅;;胰岛素抵抗的研究进展[J];医学综述;2007年24期

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本文编号：2652673