骨髓间充质干细胞旁分泌HGF体外调控肝星状细胞的研究

发布时间：2020-05-12 02:37

【摘要】：目的:通过构建transwell上下双层共培养体系,探讨大鼠骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)旁分泌肝细胞生长因子(Hepatocyte Growth Factor,HGF)对肝星状细胞(Hepatic Stellate Cells,HSCs)增殖、凋亡、活化的影响。方法:采用全骨髓贴壁法分离、培养、纯化大鼠BMSCs,培养HSCs。6孔板半透膜建立上下两层细胞非直接接触共培养体系。实验设实验组(BMSCs与HSCs Transwell共培养)、空白对照组(低糖培养基与HSCs共培养)、阴性对照组(HSCs与HSCs共培养)、c-met抑制剂组(BMSCs与HSCs Transwell共培养中加c-met抑制剂预处理)。在倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞仪鉴定BMSCs,免疫荧光共聚焦定量鉴定HSCs的活性后,各组细胞共培养48h,流式细胞仪检测HSCs凋亡率,MTT法检测HSCs的增殖,免疫荧光共聚焦定量检测HSCs中α-SMA的表达量,酶联免疫吸附法(ELISA法)检测各组共培养体系48h上清液中HGF的浓度。结果:1.倒置相差显微镜下观察BMSCs呈成纤维形、三角形或不规则形,流式细胞仪检测MSCs高表达阳性表面分子CD29、CD90,低表达造血细胞表面标记物CD45;活化HSCs呈梭形,表达α-SMA;2.MTT结果显示:与空白对照组、阴性对照组、c-met抑制剂组相比,实验组HSCs的增殖降低(P0.01);3.流式细胞仪检测HSCs凋亡率:实验组中HSCs的凋亡率高于其他组,且差异均有统计学意义(P0.05),而空白对照组、阴性对照组、c-met抑制剂组之间的凋亡率无统计学意义(P0.05);4.免疫荧光共聚焦结果定量后提示:与空白对照组、阴性对照组、c-met抑制剂组相比,实验组HSCs中α-SMA的表达量降低,且差异具有统计学意义(P0.01),而其他3组之间α-SMA的表达量无统计学意义(P0.05);5.ELISA结果示:实验组上清液中HGF的浓度明显高于其他组,且与其他组相比差异均有统计学意义(P0.01)。结论:BMSCs可以通过旁分泌HGF促进HSCs的凋亡,抑制HSCs的增殖、活化。
【图文】：

大鼠P0代骨髓间充质干细胞的形态学观察Figure1-1MorphologicalobservationofratP0generationbonemarrowmesenchymalstemcells

大鼠骨髓间充质干细胞的形态学观察Figure1-2Morphologyofratbonemarrowmesenchymalstemcellsa～f分别为P0、P1、P2、P3、P4、P5代骨髓间充质干细胞（×40）
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R575.2

【参考文献】

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本文编号：2659495