慢性心理应激经肠道促进大鼠肝纤维化发展的研究

发布时间：2020-05-12 06:41

【摘要】：背景肝纤维化是许多慢性肝病发展至肝硬化的必经之路,有许多研究证明慢性心理应激可导致肝炎加重、促进肝纤维化的发展,然而其具体机制尚不明确。传统观念认为慢性心理应激可直接作用于肝脏。慢性心理应激状态下,下丘脑-垂体-肾上腺轴激活并释放糖皮质激素,导致免疫系统平衡失调、全身及肝脏局部炎症加重,肝细胞内Fas抗原表达升高,肝细胞凋亡加速、肝血流量下降,从而促进肝纤维化的发生和发展。然而有研究发现心理应激对肝脏的影响在体内体外不同:在体内环境中心理应激状态下糖皮质激素水平升高,肝细胞内Fas抗原表达升高,细胞凋亡加速;而在体外糖皮质激素环境下培养,肝细胞内Fas抗原表达未升高,细胞凋亡不明显。慢性心理应激究竟通过何种途径作用于肝脏尚不明确。我们知道脑-肠之间存在极其复杂的沟通机制,即“脑-肠轴”,是一个胃肠系统与大脑整合的综合生理模型。过度或有害的心理应激能造成“脑-肠”轴紊乱,导致肠道动力失调、肠道敏感性增高、肠道通透性增加和肠道屏障功能障碍。而这些病变作用于“肠-肝轴”,将导致LPS等肠道细菌产物移位至肠外,到达肝脏后将导致肝脏炎性级联反应,对肝硬化及其并发症有重要促进作用。我们注意到“脑-肠轴”与“肠-肝轴”的交叉点在于肠道。由此我们设想,慢性心理应激可能通过肠道途径作用于肝脏,我们提出“脑-肠-肝”轴的概念来解释慢性心理应激的促肝纤维化作用。目的观察慢性心理应激对大鼠肠道通透性和细菌移位的影响,研究慢性心理应激经肠道促进大鼠肝纤维化发展的作用。方法将60只SD大鼠随机分为6组:正常组、心理应激组、橄榄油组(肝纤维化阴性对照)、橄榄油+心理应激组、肝纤维化组、肝纤维化+心理应激组。给予大鼠40%四氯化碳皮下注射(3ml/kg,2次/周,首剂加倍)8周建立肝纤维化模型,皮下注射橄榄油作为阴性对照。造模第5周起,采用10种不可预知性刺激因素,每日随机选取一种刺激大鼠,持续4周制备慢性心理应激模型。造模第8周末处死大鼠,门静脉取血,采用光度法检测脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)表达水平;取小肠组织,HE染色后评价肠黏膜病变程度;采用免疫组织化学法检测小肠1型促肾上腺皮质激素释放激素受体(corticotropin-releasing hormone receptor 1,CRFR1)、occludin蛋白表达情况;取肝脏组织,Masson染色后评价肝纤维化程度。结果1.肠组织CRFR1蛋白表达半定量结果显示,CRFR1蛋白表达量在心理应激组、橄榄油+心理应激组、肝纤维化+心理应激组中逐步升高,且分别较各自阴性对照组表达上调(P0.001)。同正常组及橄榄油组相比,肝纤维化大鼠CRFR1蛋白表达明显上调,而施加慢性心理应激后其CRFR1蛋白表达量进一步增高(P0.001)2.肠组织occludin蛋白表达半定量结果显示,occludin蛋白表达量在心理应激组、橄榄油+心理应激组、肝纤维化+心理应激组中分别较各自阴性对照组表达下调(P0.05)。同正常组及橄榄油组相比,肝纤维化大鼠occludin蛋白表达明显下调,而施加慢性心理应激后其occludin蛋白表达量进一步降低(P0.05)。3.肠黏膜病变评估结果显示:(1)肝纤维化组大鼠肠绒毛较正常组及橄榄油组变短变粗,施加心理应激后肠绒毛萎缩程度进一步加深,趋于短、细(P0.05);(2)肝纤维化组肠黏膜损伤指数高于橄榄油组及正常组,施加心理应激刺激后其肠黏膜损伤指数进一步增高(P0.05)。4.门静脉LPS水平测定结果示:肝纤维化大鼠LPS表达量明显高于正常组及橄榄油组,施加心理应激后进一步增高(P0.05)。5.肝纤维化分期评分结果显示,肝纤维化大鼠肝纤维化程度明显较正常组及橄榄油组严重,施加心理应激后其肝纤维化程度进一步增高(P0.05)。结论1.CRFR1是检测心理应激的敏感指标,可以用以评估机体对心理应激的反应程度。2.肝纤维化大鼠处于心理应激高敏感状态。3.慢性心理应激所致肠道病变可能在慢性心理应激加重肝纤维化大鼠肝纤维化程度的过程中起重要作用。
【图文】：

3.1 一般情况与正常大鼠相比，慢性心理应激大鼠皮毛杂乱无光泽，摄食、活跃程度下降，体重减轻。肝纤维化大鼠上述表现更加明显。施加心理应激后，肝纤维化大鼠上述表现进一步加重，部分大鼠出现腹水、肠管水肿。60 只大鼠建模过程中死亡 10 只，最终进入结果分析 50 只。3.2 肠道 CRFR1 蛋白表达情况肠组织CRFR1 蛋白表达半定量结果显示，CRFR1 蛋白表达量在心理应激组、橄榄油+心理应激组、肝纤维化+心理应激组中逐渐升高，，且分别较各自阴性对照组表达上调，差异具有统计学意义（P＜0.001，图 3.4A）。同正常组及橄榄油组相比，肝纤维化大鼠 CRFR1 蛋白表达明显上调，而施加慢性心理应激后其CRFR1 蛋白表达量进一步增高，差异具有统计学意义（P＜0.001, 图 3.4 A）。各组肠道 CRFR1 蛋白免疫组化定性结果见图 3.1，相对定量结果见表 3.1。

组别nCRFR1 P 值正常组 10 0.0012±0.0003心理应激组 7 0.1107±0.02100.000橄榄油组 7 0.1180±0.0025橄榄油+心理应激组 8 0.2432±0.01460.000肝纤维化组 9 0.2245±0.0128*肝纤维化+心理应激组 9 0.3637±0.27530.000注：与正常组及橄榄油组相比，*P <0.001。3.3 肠道 occludin 蛋白表达情况肠组织 occludin 蛋白表达半定量结果显示，occludin 蛋白表达量在心理应激组、橄榄油+心理应激组、肝纤维化+心理应激组中分别较各自阴性对照组表达下调，差异具有统计学意义（P＜0.05, 图 3.4 B）。同正常组及橄榄油组相比，肝纤维化大鼠 occludin 蛋白表达下调，而施加慢性心理应激后其 occludin 蛋白表达量进一步降低，差异具有统计学意义（P＜0.05，图 3.4 B）。各组肠道 occludin蛋白免疫组化定性结果见图 3.2，相对定量结果见表 3.2。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R575.2

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本文编号：2659826