IL-22对骨髓来源巨噬细胞相关炎症因子表达的影响

发布时间：2020-05-25 16:52

【摘要】：目的:探讨IL-22对骨髓来源巨噬细胞相关炎症因子iNOS,IL-1β和TNF-α表达的影响。方法:从小鼠的股骨分离骨髓细胞,使用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)刺激骨髓细胞,经过7天的分化培养获得骨髓来源巨噬细胞(M0型巨噬细胞),再用脂多糖(LPS)刺激M0型巨噬细胞诱导为M1型巨噬细胞。在骨髓来源巨噬细胞培养液中加入Iatex beads,用显微镜观察骨髓巨噬细胞的吞噬情况,计算骨髓来源巨噬细胞的吞噬率。用不同浓度2.5ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml、160ng/ml的IL-22分别干预骨髓来源巨噬细胞36h,用CCK8法检测IL-22对骨髓来源巨噬细胞活性的影响。采用流式细胞术检测M0型巨噬细胞和M1型巨噬细胞的细胞标志物,用IL-22(20ng/ml)干预M1型巨噬细胞36h后,采用流式细胞术分别检测LPS组、LPS+IL-22组M1型巨噬细胞的标记物;用ELISA分别检测LPS组和LPS+IL-22组的M1型巨噬细胞培养上清的IL-1β、TNF-α分泌水平;IL-22(20ng/ml)不同时间12h、24h和36h分别干预M1型巨噬细胞,用RT-PCR分别检测LPS组和LPS+IL-22组的M1型巨噬细胞相关炎症因子iNOS,IL-1β,TNF-α的mRNA表达水平。结果:通过显微镜观察到M0型巨噬细胞与M1型巨噬细胞形态有明显的区别。经过7天的分化培养,骨髓来源巨噬细胞的纯率为99.3±0.4%,成功获得高纯度的成熟M0型巨噬细胞。通过荧光显微镜观察到骨髓来源巨噬细胞吞噬率达99%,说明诱导的骨髓巨噬细胞具备正常的吞噬功能。经过CCK8检测骨髓来源巨噬细胞活性后,本实验选择IL-22的作用浓度为20ng/ml,未对骨髓来源巨噬细胞的活力构成影响。用IL-22(20ng/ml)干预M1型巨噬细胞36h后,LPS+IL-22组CD11b+F4/80+iNOS+细胞的比例为68.8.9±2.6%,低于LPS组(P0.01),差异具有统计学意义。与LPS组相比,LPS+IL-22组促炎细胞因子IL-1β(431±47 vs 296±55pg/ml,t=3.214,P=0.032)和TNF-α(629±74 vs 274±24pg/ml,t=7.896,P=0.001)分泌水平均降低,差异具有统计学意义。IL-22(20ng/ml)不同时间12h、24h和36h分别干预M1型巨噬细胞后,与LPS组相比,LPS+IL-22组的促炎细胞因子iNOS,IL-1β,TNF-α的mRNA表达均有不同水平的降低,其中,TNF-αmRNA表达水平随着IL-22干预时间延长而下降(P0.01);IL-1β的24h和36h组mRNA表达水平降低(P0.05);iNOS的24h和36h组mRNA表达水平也降低(P0.05),差异均具有统计学意义,而iNOS 12h组mRNA表达水平升高(P0.05),差异无统计学意义。结论:LPS诱导M0型巨噬细胞成M1型巨噬细胞后,其炎症因子iNOS,IL-1β,TNF-α的表达增加。IL-22可抑制LPS诱导的M1型巨噬细胞炎症因子iNOS,IL-1β,TNF-α的表达,减轻其炎症反应,抑制肝纤维化的进程。本研究结果展示了IL-22对巨噬细胞的抗炎作用,为今后抗纤维化相关药物的研发提供了坚实的实验基础。
【图文】：

图 1 骨髓来源巨噬细胞形态(× 200 )A.M0 型巨噬细胞；B.M1 型巨噬细胞Fig.1 Morphology of bone marrow-derived macrophagesA.M0 macrophages;B. M1 macrophages(× 200 )2. 骨髓来源巨噬细胞的吞噬功能通过荧光显微镜观察到骨髓来源巨噬细胞吞噬率达 99%（吞噬率%=吞噬 Iatex beads 细胞数/细胞总数），说明诱导的骨髓巨噬细胞具备正常的吞噬功能，有正常的生理功能，见图 2。

图 1 骨髓来源巨噬细胞形态(× 200 )A.M0 型巨噬细胞；B.M1 型巨噬细胞Fig.1 Morphology of bone marrow-derived macrophagesA.M0 macrophages;B. M1 macrophages(× 200 )2. 骨髓来源巨噬细胞的吞噬功能通过荧光显微镜观察到骨髓来源巨噬细胞吞噬率达 99%（吞噬率%=吞噬 Iatex beads 细胞数/细胞总数），，说明诱导的骨髓巨噬细胞具备正常的吞噬功能，有正常的生理功能，见图 2。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R575.2

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本文编号：2680451