利用荧光探针探索多硫化氢在不同胃粘膜疾病中的表达

发布时间：2020-05-30 16:42

【摘要】：[目的]氧化还原反应广泛存在于人体的生理活动中,其平衡的紊乱会介导许多胃部疾病的发生和发展。本研究旨在通过利用荧光探针检测生物体内的一种重要的还原物质(多硫化氢)在不同胃粘膜疾病状态下的表达,并以此探索多硫化氢在胃的炎症、肠上皮化生和恶性肿瘤中的变化特点,并讨论其作为一种生物标记物的可能性。[方法]利用检测多硫化氢的“关-开”型近红外荧光探针BD-ss,分别在细胞、动物和内镜活检组织中作用后,结合相关病理特点,利用激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和小动物成像系统,检测并分析其荧光变化。[结果]经BD-ss作用后,相比较于未处理组,表皮生长因子和炎性因子作用下的HGC-27细胞中细胞中荧光强度增强(P0.001),奥沙利铂可以降低恶性增殖状态下细胞荧光强度的增强;根据小动物成像系统的结果显示,慢性炎症组中的胃荧光强度增高(P0.05),胃癌组中的胃荧光强度明显增高(P0.01),并且胃癌组的荧光保留时间长于胃炎组;相比较于正常黏膜,内镜下所取的慢性胃炎(P0.01)、肠上皮化生(P0.05)和恶性肿瘤(P0.001)组织消化后的细胞荧光强度均增高,其中恶性肿瘤组的细胞荧光强度明显高于慢性胃炎和肠上皮化生组(P0.01)。[结论]在胃的炎症和增生状态下,多硫化氢的表达均会升高,在恶性增殖状态下升高更为明显,其变化可以反映疾病状态,可以为疾病的诊断提供定量数据和拟诊结果。
【图文】：

逦滨州医学院硕士学位论文逦逡逑因此，考虑到多硫化氢在机体信号分子传递中的作用，及其在胃部疾病诊断逡逑中的空白，我们借助一种近红外荧光探针ＢＤ－ｓｓ检测多硫化氢。多硫化氢含取代逡逑反应。因此，Ｙｕ等设计了一种含有两个亲电基团的探针，能够有效捕捉多硫化氢。逡逑ａｚｏ－ＢＯＤＩＰＹ作为近红外荧光团示踪，由于吸电子基团能猝灭荧光团的荧光，逡逑ａｚｏ－ＢＯＤＩＰＹ的荧光特性可以通过从激发的荧光团到强吸电子基团之间的光诱导逡逑电子转移过程来操作（ｄｏｎｏｒ－ｅｘｃｉｔｅｄ邋ＰＥＴ；邋ｄ－ＰＥＴ）。２－氟－５－硝基苯甲酸作为光诱导逡逑电子转移过程的调制基团，因其含有双亲电位点，因此能够高选择性和高灵敏性逡逑的响应多硫化氢。在探针的合成步骤中，在ａｚｏ－ＢＯＤＩＰＹ上修饰２－氟－５－硝基苯甲逡逑酸基团后，由于在荧光团和荧光调制器之间的光诱导电子转移过程，荧光团的荧逡逑光猝灭。多硫化氢通过亲核取代氟原子形成含有裸露巯基的中间体。随后，巯基逡逑和酯键自发发生环化反应释放ａｚｏ－ＢＯＤＩＰＹ荧光团。这个串联反应能够阻止光诱逡逑导电子转移过程，，因此荧光强度迅速增加。逡逑

图１（ａ）邋ＨＧＣ－２７细胞在不同的处理下多硫化氢荧光成像和细胞凋亡过程。将细胞用１Ｌ－Ｉｐ，逡逑ＩＦＮ－７，邋ＥＧＦ，邋ＥＧＦ和奥沙利钿处理２４小时。然后在培养基中加入小ＭＢＤ－ｓｓ孵育２０分钟。逡逑使用共聚焦激光扫描显微镜的通道分别如下，红色通道：Ｘｅｘ／ｅｍ＝邋６３５／６７０－７７０邋ｎｍ；蓝色通道：逡逑、Ｘ／ｅｍ邋＝邋４０５／４１０－４９０邋ｎｍ；绿色通道：４８８／５００－５７０邋ｎｍ。叠加图像是红色，蓝色和绿色逡逑通道的组合。标尺：２０邋ｐｍ。收集的流式细胞的通道是ＡＰＣ。（ｂ）（ａ）中荧光图像数据的统计分逡逑析（ｎ邋＝邋７）。（ｃ）对（ａ）中来自流式细胞术的数据的统计分析（ＩＩ邋＝邋７）。图中显示的误差线表示平均值逡逑±ｓ．ｄ。差异通过单因素方差分析判断其差异显著性。＊＊Ｖ＜０．００１ｖ．ｓ．对照组。逡逑Ｆｉｇ．邋１邋（ａ）邋Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ邋ｉｍａｇｅｓ邋ａｎｄ邋ｆｌｏｗ邋ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ邋ｏｆ邋ｈｙｄｒｏｇｅｎ邋ｐｏｌｙｓｕｌｆｉｄｅ邋ａｎｄ邋ａｐｏｐｔｏｓｉｓ邋ｐｒｏｃｅｓｓ邋ｏｆ逡逑ＨＧＣ－２７邋ｃｅｌｌｓ邋ｕｎｄｅｒ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ．邋Ｔｈｅ邋ｃｅｌｌｓ邋ｗｅｒｅ邋ｔｒｅａｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋１Ｌ－１（３，邋ＩＦＮ－ｙ，ＥＧＦ邋ａｎｄ邋ＥＧＦ逡逑ｗｉｔｈ邋Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ邋ｆｏｒ邋２４邋ｈ．邋Ｔｈｅｎ邋ｔｈｅ邋ｍｅｄｉｕｍ邋ｗａｓ邋ａｄｄｅｄ邋ｗｉｔｈ邋Ｃａｓｐａｓｅ－３／７邋Ｇｒｅｅｎ邋Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ邋Ｒｅａｇｅｎｔ逡逑（Ｇｒｅｅｎ邋ｃｈａｎｎｅｌ）邋ｆｏｒ邋１邋ｈ邋ａｎｄ邋ｌｊｉＭ邋ＢＤ－ｓｓ邋（Ｒｅｄ邋ｃｈａｎｎｅｌ）邋ｆｏｒ邋２０邋ｍｉｎ．邋Ｎｕｃｌｅａｒ邋ＲｅａｄｙＰｒｏｂ
【学位授予单位】：滨州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R573

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本文编号：2688418