益生菌在结肠炎中对肠上皮细胞连接保护作用的研究

发布时间：2020-06-05 14:54

【摘要】：第一部分益生菌对结肠炎小鼠肠上皮细胞连接保护作用的研究目的:探讨益生菌(双歧杆菌、乳杆菌)、益生元(拉克替醇)及合生元(双歧杆菌+乳杆菌+拉克替醇)对DSS诱导的急性结肠炎小鼠肠上皮细胞的细胞连接的影响。方法:雄性C57BL/6J小鼠分为5组,除空白对照组外,其余均DSS建模,建模对照组不予灌胃处理,其余3组分别予益生菌(双歧杆菌、乳杆菌)、益生元(拉克替醇)、合生元(益生菌联合拉克替醇)灌胃1周,收集小鼠结肠标本,分别进行:病理炎症评估;透射电子显微镜观察;Occludin、ZO-1、E-cadherin、β-catenin 4种蛋白的免疫组织化学染色;Occludin、ZO-1、E-cadherin蛋白的Westen blot分析;Occludin、ZO-1、E-cadherinmRNA 的 qRT-PCR 分析。结果:1.益生菌、益生元及合生元组小鼠病理炎症评分较DSS建模组显著降低;2.透射电镜可见益生菌、益生元及合生元组小鼠较DSS建模组黏着连接松解减少、细胞脱落减少,细胞脱落过程中紧密连接显著延长,黏着连接松解减少;3.Westernblot示益生菌、益生元及合生元组小鼠较DSS建模组Occludin、ZO-1及E-cadherin蛋白在组织中的相对含量提高;4.qRT-PCR示益生菌、益生元及合生元组较DSS建模组,E-cadherin及ZO-1 mRNA的表达水平显著升高,差异有统计学意义。结论:益生菌、益生元及合生元可:1.显著降低急性结肠炎小鼠的炎症程度,减少肠上皮结构破坏;2.降低急性结肠炎小鼠黏着连接超微结构的破坏,促进细胞脱落过程中紧密连接及黏着连接的维持;3.增加急性结肠炎小鼠Occludin、ZO-1及E-cadherin蛋白在组织中的相对含量;4.上调急性结肠炎小鼠E-cadherin及ZO-1 mRNA的表达水平。第二部分布拉氏酵母菌与双歧杆菌对炎症因子作用下细胞连接保护作用的研究目的:通过共培养,探讨2种益生菌布拉氏酵母菌及双歧杆菌对IL-6作用下Caco-2细胞连接的影响。方法:单层贴壁的Caco-2细胞分为8组,分别为与布拉氏酵母菌共培养、与双歧杆菌共培养、与有害菌大肠杆菌共培养、无共培养,以及4种共培养体系中分别加入炎症因子IL-6刺激。分别使用免疫荧光染色、Western blot、免疫共沉淀、qRT-PCR,研究 Occludin/ZO-1、E-cadherin/β-catenin2 对蛋白在细胞中的定位、相对含量、相对结合量及mRNA转录水平。结果:1.免疫荧光示与双歧杆菌共培养的Caco-2细胞加入IL-6刺激后,较与大肠杆菌共培养的细胞β-catenin入核减少;可见E-Cadherin/β-catenin在细胞膜相同定位表达,较少进入胞质;与双歧杆菌共培养的Caco-2细胞加入IL-6刺激后,Occludin较少进入胞质;2.Western blot示,无共培养及与有害菌共培养的Caco-2细胞加入IL-6后E-Cadherin、ZO-1蛋白水平的下降,布拉氏酵母菌及双歧杆菌共培养的细胞加入IL-6后相应蛋白无下降;3.免疫共沉淀示,与布拉氏酵母菌、双歧杆菌共培养组,加入IL-6刺激后,与β-catenin共沉淀的E-Cadherin比例无显著下降;与大肠杆菌共培养组有显著下降;4.qRT-PCR结果示,与布拉氏酵母菌、双歧杆菌共培养细胞中,IL-6刺激可显著上调Occludin、E-Cadherin、ZO-1 mRNA的转录水平,差异有统计学意义;与大肠杆菌共培养组,IL-6刺激显著下调上述mRNA转录水平,差异有统计学意义。结论:1.双歧杆菌可减少IL-6刺激下Caco-2细胞的ββ-catenin入核,维持E-Cadherin/β-catenin在细胞膜的共定位及Occludin的膜定位;2.布拉氏酵母菌及双歧杆菌可抑制IL-6刺激下细胞E-Cadherin、ZO-1蛋白水平的下降;3.布拉氏酵母菌及双歧杆菌可抑制IL-6刺激下细胞β-catenin结合E-Cadherin比例的下降;4.与布拉氏酵母菌、双歧杆菌共培养细胞中,IL-6刺激可上调Occludin、E-Cadherin、ZO-1 mRNA 的转录水平。
【图文】：

变化情况图,变化情况,饮用水,症状

实验结果逡逑１．小鼠一般情况逡逑建模对照组与各个干预组小鼠在给予ＤＳＳ饮用水后第３天开始出现大便不成逡逑形、肉眼血便等表现，同时伴有倦怠少动、毛色暗淡、体重进行性下降。建模对照逡逑组第６天换回常规饮用水后症状逐渐减轻；各个干预组灌胃第４天体重达到最低，逡逑此后症状逐渐减轻。各组小鼠体重变化如下（ｎ邋＝邋５只）：逡逑

益生菌,建模,灌胃

逦表８各组小鼠结肠炎症程度病理评分（ｎ＝５）逦逡逑逦ＭＪ逦病理评分逦与建模组对比Ｐ值逡逑正常对照逦０逡逑ＤＳＳ邋建模逦２０．２逦（±１０．９）逡逑ＤＳＳ＋益生菌逦５．４逦（±２．８）逦０．００９逡逑ＤＳＳ＋益生元逦９．２逦（±５．０）逦０．０３７逡逑ＤＳＳ＋合生元逦１０．２逦（±５．２）逦０．０４９逡逑３０邋逦
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R574.62

【参考文献】