Hedgehog信号通路在大鼠急性胰腺炎中的作用及其对TNF-α、IL-10的影响

发布时间：2017-03-27 15:02

  本文关键词：Hedgehog信号通路在大鼠急性胰腺炎中的作用及其对TNF-α、IL-10的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是临床常见急腹症,具有起病急、病情重、变化快等特点,除了胰腺本身病变之外,还可能引起胰腺外器官和组织的损伤,甚至最终或可诱发全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)、多器官功能障碍综合征(multiple-organ dysfunction syndrome,MODS)等而导致死亡。目前,关于AP发生发展机制的研究很多,细胞内信号通路即为其中重要的一个方面。大量研究发现,Hedgehog(Hh)信号通路作为细胞内信号通路的新热点,不仅在动物胚胎发育、细胞分化增殖、器官发育调节等生理过程中发挥着重要作用,还与许多疾病的发生发展有着直接的关系。但是,目前Hh信号通路与疾病间关系的研究大多集中在其异常激活所导致的恶性肿瘤疾病中,如胰腺癌、胃癌、卵巢癌等,而与炎症性疾病的研究则相对较少。故本研究拟初步探讨Hh信号通路在AP中的作用及其可能的机制。目的:本研究应用Hh信号通路的特异性激动剂Purmorphamine预处理大鼠AP模型,并通过监测Hh信号通路对血清中淀粉酶(Amylase,AMY)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-10(interleukin-10,IL-10)的水平的影响,初步探讨Hh信号通路的激活对大鼠AP的作用,并研究其可能的机制。方法:1实验分组:54只清洁级成年雄性SD大鼠,体重220±20 g,随机分为正常对照组(N组,n=18)、急性胰腺炎组(AP组,n=18)、Purmorphamine干预组(Pur组,n=18),每组再以不同时间点6h、12h、24h分为三个亚组,每个亚组6只大鼠。2制造模型:本研究采用L-精氨酸腹腔注射法制造大鼠AP模型。AP组给予腹腔注射20%L-精氨酸2.5 g/kg,间隔1 h注射2次,N组则给予等体积的生理盐水腹腔注射2次。Pur组于造模前1 h给予Purmorphamine溶液0.69 mg/kg腹腔注射1次,另两组给予等体积的DMSO溶液腹腔注射1次。最后一次腹腔注射后,分别于6 h、12 h、24 h处死各组大鼠,留取血清及胰腺组织。3实验方法:应用淀粉酶试剂盒检测血清中淀粉酶(amylase,AMY)水平,利用ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)方法检测血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)测定胰腺组织中Ptch1 m RNA表达水平。4统计学方法:应用SPSS 22.0软件包进行统计学处理,P0.05认为具有统计学意义。结果:1血清AMY:在各时间点,N组血清AMY水平较低且无显著变化;AP组及Pur组各时间点AMY水平较N组均显著升高(P0.05),且随时间延长而逐渐上升;与AP组相比,Pur组各时间点血清AMY水平则明显下降(P0.05)。2血清TNF-α:N组血清TNF-α在各时间点均无显著变化,且水平较低;与之相比,AP组和Pur组血清TNF-α水平都出现了明显升高(P0.05);但Pur组与AP组相比,血清TNF-α水平则显著降低(P0.05)。3血清IL-10:N组血清IL-10水平在各时间点均较低;AP组和Pur组分别与N组比较,各时间点血清IL-10均显著升高(P0.05);应用Purmorphamine干预后,Pur组血清IL-10较AP组在各时间点均显著升高(P0.05)。4胰腺组织Ptch1 m RNA:在各时间点,N组胰腺Ptch1 m RNA均未见明显表达;AP组和Pur组分别与N组比较,Ptch1 m RNA水平均显著升高(P0.05),且随时间呈上升趋势;由于Purmorphamine的作用,Pur组各时间点Ptch1 m RNA水平较AP组均进一步明显升高(P0.05)。5 AP组及Pur组两组中不同指标间的相关性检验:将血清TNF-α与血清AMY进行相关性分析,二者呈正相关,相关系数r=0.704(P0.01);将血清IL-10与血清AMY进行相关性分析,二者呈负相关,相关系数r=-0.429(P0.01);将血清IL-10与血清TNF-α进行相关性分析,二者呈负相关,相关系数r=-0.463(P0.01);将胰腺组织Ptch1 m RNA与血清IL-10进行相关性分析,二者呈正相关,相关系数rs=0.700(P0.01);将胰腺组织Ptch1 m RNA与血清TNF-α进行相关性分析,结果提示二者并无相关性(rs=-0.129,P=0.4540.01)。结论:1应用L-精氨酸腹腔注射方法可成功复制大鼠AP模型,为研究Hh信号通路在大鼠AP中的作用提供了条件。2 AMY是反应急性胰腺炎炎症的重要指标,给予外源性Hh信号通路激动剂Purmorphamine后,可引起大鼠AP模型血清AMY水平明显下降,胰腺损害减轻,促进急性胰腺炎的恢复。3 TNF-α作为关键性的促炎因子,在AP发生、发展中起重要作用,其水平可直接反应炎症严重程度;抗炎因子IL-10则可通过降低血清AMY、抑制包括TNF-α在内的炎症因子等方式在AP的进展中起保护作用。4应用外源性Hh信号通路激动剂Purmorphamine后,Ptch1的表达明显升高,可作为Hh信号通路激活的标志。在AP中,Hh信号通路的激活可引起IL-10水平明显升高,进而TNF-α水平显著下降,说明Hh信号通路参与了AP的发展过程,并可能通过上调IL-10而对AP起到保护作用。
【关键词】：急性胰腺炎 Hedgehog信号通路 Purmorphamine 肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-10 Ptch1
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R576
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文缩写11-13
• 前言13-14
• 材料与方法14-21
• 结果21-23
• 附图23-27
• 附表27-29
• 讨论29-34
• 结论34-35
• 参考文献35-38
• 综述Hedgehog信号通路与胰腺疾病38-50
• 参考文献45-50
• 致谢50-51
• 个人简历51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 陈婧文;汤其群;;Hedgehog信号通路与脂肪细胞发育[J];中国生物化学与分子生物学报;2011年01期

2 杨元生;崔淑兰;陈垦;王晖;;重症急性胰腺炎实验动物模型的研究进展[J];世界华人消化杂志;2009年25期

3 林旭红;李永渝;;急性胰腺炎发病机制及相关治疗的研究进展[J];中国病理生理杂志;2010年05期

4 ;Tumor necrosis factor α antibody prevents brain damage of rats with acute necrotizing pancreatitis[J];World Journal of Gastroenterology;2004年19期

5 Luo-Wei Wang;Han Lin;Yi Lu;Wei Xia;Jun Gao;Zhao-Shen Li;;Sonic hedgehog expression in a rat model of chronic pancreatitis[J];World Journal of Gastroenterology;2014年16期

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本文编号：270552