荔枝核总黄酮对肝纤维化病理相关因子表达的影响

发布时间：2020-06-10 01:01

【摘要】：目的:研究荔枝核总黄酮(TFL)对肝纤维化(HF)病理过程中转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的人肝星状细胞(HSC-LX2)凋亡作用及TLR4、NF-κB、IL-1RⅠ表达的影响。方法:将培养好的HSC-LX2随机分为正常组、TGF-β_1组及TFL组(150、300、600mg/L)。TGF-β_1组及TFL组细胞接种于含10%FBS的DMEM+5μg/L TGF-β_1、10cm培养皿中,培养24h后,TFL组分别加入150、300、600mg/L TFL,培养48小时后测定。采用Hoechst33258染色法观察细胞形态学变化;采用流式细胞术检测细胞周期;采用FITC Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡;采用Western blot法检测细胞中Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、白细胞介素1受体Ⅰ(IL-1RⅠ)蛋白的表达。结果:(1)Hoechst33258染色法观察各组:正常组、TGF-β_1组细胞核形态完整,TFL组可见细胞核固缩、裂解、凋亡小体形成等细胞凋亡形态学变化。(2)流式细胞仪检测结果显示,TGF-β_1组中G_0/G_1期细胞百分比(45.56±0.72)、S期细胞百分比(45.21±0.18)与正常组中G_0/G_1期细胞百分比(53.74±0.96)、S期细胞百分比(34.93±1.89)比较,差异具有统计学意义(P0.05);150mg/L TFL组中G_0/G_1期细胞百分比(58.05±5.17)、S期细胞百分比(33.47±4.67),300mg/L TFL组中G_0/G_1期细胞百分比(73.23±4.08)、S期细胞百分比(19.97±3.88)及600mg/L TFL组中G_0/G_1期细胞百分比(86.91±2.15)、S期细胞百分比(7.01±1.54)均分别与TGF-β_1组中G_0/G_1期细胞百分比、S期细胞百分比比较,差异具有统计学意义(P0.05);随着TFL浓度增高,G_0/G_1期细胞增加(P0.05),S期细胞减少(P0.05),TFL阻滞细胞于G_0/G_1期。TGF-β_1组中细胞早期凋亡率(1.16±0.60)、晚期凋亡率(5.53±2.41)、总凋亡率(6.70±3.01)与正常组中细胞早期凋亡率(1.03±0.75)、晚期凋亡率(6.80±3.34)、总凋亡率(7.83±3.26)比较,差异无统计学意义(P0.05);150mg/L TFL组中细胞早期凋亡率(18.16±6.73)、晚期凋亡率(14.93±0.80)、总凋亡率(33.10±6.75),300mg/L TFL组中细胞早期凋亡率(25.30±1.57)、晚期凋亡率(15.80±0.43)、总凋亡率(41.13±1.15)及600mg/L TFL组中细胞早期凋亡率(18.96±1.36)、晚期凋亡率(29.53±1.16)、总凋亡率(48.50±1.13)均分别与TGF-β_1组中细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率比较,差异具有统计学意义(P0.05);随着TFL浓度增高,TFL对HSC-LX2凋亡具有促进作用,更倾向于促进细胞晚期凋亡。(3)Western blot法结果显示,TGF-β_1组HSC-LX2中TLR4蛋白(1.05±0.11)、NF-κB蛋白(1.19±0.10)、IL-1RⅠ蛋白(1.17±0.12)表达量与正常组HSC-LX2中TLR4蛋白(0.86±0.74)、NF-κB蛋白(0.88±0.13)、IL-1RⅠ蛋白(0.90±0.12)表达量比较,差异具有统计学意义(P0.05);150mg/L TFL组HSC-LX2中TLR4蛋白(0.87±0.05)、NF-κB蛋白(0.77±0.05)、IL-1RⅠ蛋白(0.78±0.02)表达量,300mg/L TFL组HSC-LX2中TLR4蛋白(0.61±0.05)、NF-κB蛋白(0.56±0.07)、IL-1RⅠ蛋白(0.53±0.08)表达量及600mg/L TFL组HSC-LX2中TLR4蛋白(0.40±0.07)、NF-κB蛋白(0.36±0.06)、IL-1RⅠ蛋白(0.35±0.05)表达量均分别与TGF-β_1组HSC-LX2中TLR4蛋白、NF-κB蛋白、IL-1RⅠ蛋白表达量比较,差异具有统计学意义(P0.05);TFL组TLR4蛋白、NF-κB蛋白、IL-1RⅠ蛋白表达量均低于TGF-β_1组;且随着TFL浓度升高,HSC-LX2内TLR4蛋白、NF-κB蛋白、IL-1RⅠ蛋白表达量逐渐降低。结论:(1)TFL抗肝纤维化的机制可能与TFL促进TGF-β_1诱导的HSC-LX2凋亡相关;(2)TFL促进TGF-β_1诱导的HSC-LX2凋亡的分子机制可能与降低TLR4、NF-κB在HSC-LX2内的表达相关;(3)TLR-IL-1R炎症通路可能参与了肝纤维化的过程,通过抑制TLR-IL-1R炎症通路,可望成为抗肝纤维化的一条新途径。
【图文】：

22图 1 造模结果Fig.1 Modeling results2.2 TFL 对 HSC-LX2 形态学变化比较Hoechst33258 染色法结果显示，，正常组、TGF-β1组细胞核形态完整；TFL 组可见细胞核固缩、裂解、凋亡小体形成等细胞凋亡形态学变化，并随着 TFL 浓度的增大，细胞数量减少，凋亡细胞比例增大。如图 2

23注：1：正常组；2：TGF-β1组；3：150mg/L TFL 组；4：300mg/L TFL 组；5：600mg/L TFL 组。图 2 各组细胞凋亡形态（400×）Fig.2 Apoptotic morphology of cells in different groups (400×).3 TFL 对 HSC-LX2 细胞周期的影响流 式 细 胞 仪 检测 结 果 显 示 ， TGF-β1组 中 G0/G1期 细 胞 百 分 比45.56±0.72）、S 期细胞百分比（45.21±0.18）与正常组中 G0/G1期细胞分比（53.74±0.96）、S 期细胞百分比（34.93±1.89）比较，差异具有
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R575.2

【参考文献】

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本文编号：2705538