Survivin反义寡核苷酸对大鼠肝星状细胞HSC-T6凋亡的影响

发布时间：2020-06-10 03:50

【摘要】： 目的:通过survivin反义寡核苷酸(Antisense Oligodeoxynucleotides,ASODN)转染HSC-T6细胞株,研究其对HSC-T6细胞株凋亡的影响。方法:实验分为空白组、脂质体组、1000nmol/LSODN组、ASODN组(400nmol/ L、800nmol/L、1000nmol/L)。脂质体介导survivin寡核苷酸转染HSC-T6细胞24小时后,倒置荧光显微镜下观察转染效率。Survivin寡核苷酸转染HSC-T6细胞48小时后,通过RT-PCR、western-blotting检测survivin基因表达的改变,倒置显微镜下观察细胞形态的改变,PI单染流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:转染24小时后,于倒置荧光显微镜下观察发现:ODN各浓度组细胞内均可见到清晰的绿色荧光,转染效率均达到80%;转染作用48小时后,RT-PCR及werstern-blot结果显示:与空白组、脂质体组、1000nmol/LSODN组比较,ASODN各浓度组survivin mRNA及蛋白表达量均低于各对照组(p0.01);ASODN各浓度组survivin mRNA及蛋白表达量组间比较,均有统计学意义(p0.01),空白组、脂质体组、1000nmol/LSODN组组间比较无统计学差异(p0.05)。在倒置显微镜下观察发现ASODN各浓度组细胞出现明显的凋亡现象;PI单染流式细胞仪检测显示:与空白组、脂质体、1000nmol/LSODN组比较,ASODN各浓度组细胞凋亡率明显提高(p0.05);ASODN各浓度组凋亡率组间比较,均有统计学差异(p0.01)。空白组、脂质体组、1000nmol/LSODN组组间比较无统计学差异(p0.05)。结论:1、HSC-T6细胞高表达survivin; 2、Survivin ASODN能抑制survivin基因的表达和诱导HSC-T6细胞的凋亡。
【图文】：

电泳图,电泳图,HSC-T6细胞,脂质体

经1.0%琼脂糖凝胶与0.5xTBE电泳液中100伏电泳30分钟，紫外投射仪下可见2条清晰的条带，由上到下分别为28s、18s,且28s/18s>1.5,提示RNA无明显降解，见图3。图3 总RNA电泳图注：1：空白组；2：脂质体组；3：1000nmol/LSODN； 4：400nmol/LASODN；5：800nmol/LASODN；6:1000nmol/LASODN；2.2 Survivin ASODN对HSC-T6细胞survivin mRNA表达的影响RT-PCR产物电泳结果显示：在576 bp处各组均可见到均匀一致的GAPDH基因的条带；在260bp处各组细胞均出现不同程度的特异性survivin基因条带。用图像分析仪对扩增产物进行分析，结果显示：各ASODN组Survivin mRNA 表达量均弱于各对照组survivin mRNA表达量且差异有显著性（p<0.01），并且随着ASODN转染浓度的增大，survivin mRNA表达量逐渐降低，呈现剂量依赖性。空白组、脂质体组及SODN组中HSC-T6细胞survivin mRNA表达量差异无统计学意义（p>0.05），，见图4、表1。

HSC-T6细胞,脂质体,灰度值,空白

图4 ASODN对HSC-T6细胞Survivin mRNA表达的影响注：M:DNAmarker；1：空白组；2：脂质体组；3：1000nmol/LSODN；4：400nmol/LASODN；5：800nmol/LASODN；6:1000nmol/LASODN；表1 各组细胞survivin/GAPDH mRNA表达灰度值比（x ±S）分组灰度值比空白组 0.947±0.026b空脂质体组 0.907±0.018bSODN 组 (1000nmol/L) 0.903±0.009bASODN 组（400nmol/L） 0.606±0.017acASODN 组（800nmol/L） 0.463±0.020acASODN 组（1000nmol/L） 0.252±0.029ac
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R575.2

【参考文献】