骨髓间充质干细胞移植治疗慢性萎缩性胃炎的实验研究

发布时间：2020-06-20 01:47

【摘要】：研究背景骨髓间充质干细胞（BMMSCs）是一类来源于中胚层的具有多向分化潜能的成体干细胞，而且具有低免疫原性、易于培养扩增、遗传背景稳定等特点，成为组织工程学较为理想的种子细胞。目前已广泛应用于机体各系统疾病的研究之中，但尚无在慢性萎缩性胃炎（CAG）中的应用报道。CAG以胃固有腺体减少为特征，与胃癌发生关系密切，目前尚无理想药物逆转其萎缩病变。目的探究骨髓间充质干细胞对慢性萎缩性胃炎的治疗作用。方法 1.将大鼠随机分为模型组和正常组，模型组自由饮用0.1%氨水，前10周用2％水杨酸钠和30％酒精混合溶液灌胃，后12周用20mmol/L去氧胆酸钠溶液灌胃；正常对照组正常饮水，用蒸馏水灌胃22周。 2.采用全骨髓贴壁法分离纯化大鼠BMMSCs，同时提取大鼠胃黏膜匀浆上清液并测定其蛋白浓度为1.5ug/ul，按照150ug/ml对BMMSCs进行诱导5周后利用细胞免疫荧光方法鉴定细胞角蛋白以及巢蛋白的表达。 3.将模型大鼠与正常大鼠分别分为细胞移植组与对照组，在移植组大鼠中，CM-Dil标记的BMMSCs按照2x106/只的量，分别通过尾静脉注射与胃壁注射进行移植，模型对照组分别给予尾静脉或胃壁注射等体积生理盐水作为对照。细胞移植2周、4周后分别通过冰冻切片观察CM-Dil荧光以及FISH方法鉴定BMMSCs在胃内定植情况，并观察胃病理学指标改善情况。结果 1.建模22周后，模型组大鼠与正常组比较，胃窦腺体萎缩明显，黏膜层变薄且黏膜肌层相对增厚，炎性细胞浸润明显。 2. BMMSCs经胃黏膜匀浆上清诱导后第7天开始出现圆形或椭圆形细胞，5周后鉴定细胞角蛋白表达阳性，巢蛋白阴性。 3.在胃壁注射BMMSCs组中，于移植后2周，可观察到CM-Dil标记的荧光， 4周后未见CM-Dil标记的荧光，但在雌鼠中通过FISH发现BMMSCs在胃内的定植。其他各组在观察时间段内均未见BMMSCs定植。BMMSCs移植后4周，萎缩性胃炎模型中移植组与对照组相比，炎性细胞浸润明显减轻（p0.05），但萎缩程度与黏膜层厚度比较没有统计学差异（p0.05）。结论 1.综合应用30%酒精、2%水杨酸钠、20mmol/L的脱氧胆酸钠及0.1%氨水，22周后成功建立了萎缩性胃炎模型，此模型建立方法简单，无需特殊设备和条件。 2.胃黏膜匀浆上清液可诱导BMMSCs分化为上皮细胞。 3. BMMSCs通过胃壁注射移植2周、4周后均可观察到细胞在胃壁内的定植；在CAG模型中，BMMSCs在移植后4周内可减轻炎性细胞浸润程度，但对萎缩无明显改善。
【学位授予单位】：中国人民解放军军医进修学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R573.3
【图文】：

正态分布,灌胃,肺组织,大鼠

的窦、体部分别观察 5 个视野，计算平均值。察指标：肠化生，胃黏膜上皮细胞细胞核多形性，无。理均数±标准差（x ±s）表示，应用 SPSS17.0 软件进符合正态分布应用 t 检验分析，不符合则用秩和检异。结果，有 2 只大鼠（两组各 1 只）因灌胃不当导致死亡织放入水中，提示液体灌入肺内致使肺组织下沉。

变化曲线,平均体重,大鼠,变化曲线

图 2 两组大鼠平均体重变化曲线图表 1 两组间观察指标比较察指标正常组模型组 9 18479.5±125.6 370.8±93.0 0.000±0.000 0.111±0.471 0.000±0.000 1.111±0.471 0.667±0.500 1.533±0.524 0.889±0.601 2.111±0.583 )（um）

【参考文献】