核心蛋白聚糖DECORIN在肝纤维化形成机制中的作用

发布时间：2020-06-20 01:57

【摘要】：肝纤维化是多种慢性肝病共有的病理改变。近年来关于肝纤维化发生、发展的机制及其治疗己从整体、细胞和分子水平进行了大量的研究，资料表明肝细胞和肝星形细胞（hepatic stellate cell,HSC）是肝纤维化发生、发展中最重要的细胞，肝细胞损伤是肝纤维化的重要启动因素，肝星形细胞激活是肝纤维化发生的中心环节。肝纤维化是肝脏以胶原为主的细胞外基质合成和降解失衡的结果。许多病因可以造成肝损伤，我国以病毒性肝炎为主要原因，当前对原发病变仍无有效根治的措施，因此减轻和阻止纤维化反应是十分重要的治疗目标。 Decorin主要由成纤维细胞合成，属于分泌型、小分子、富含亮氨酸蛋白多糖（small，leucine－rich proteoglycans，SLRPs）基因扩展家族成员之一，在调节细胞粘附、迁徙、增殖及胶原纤维形成中起重要作用。研究表明decorin在防止肾小球、肺等组织纤维化中起作用，decorin cDNA最近被用作一种新的基因治疗工具来治疗由TGF β增高引起的纤维性疾病。Decorin能够使Bleomycin 诱发仓鼠肺纤维化的各项病理指标显著降低，提示decorin在抗肺纤维化中的药理作用。Decorin与肝纤维化的关系，国外学者通过免疫组化和原位杂交等技术仅作了不同生理病理状态下decorin在肝脏各种细胞的定性定位研究。国内关于decorin的研究很少，有关decorin与肝纤维化的研究尚属空白。我们进行 decorin对肝细胞和肝星形细胞影响以及细胞因子对decorin表达影响的体外研究，以大鼠肝星形细胞株（HSC-T6）细胞和正常人肝细胞株（L-02）细胞为研究靶细胞，从细胞和基因水平了解decorin在体外对肝脏细胞的调控作用，同时选择 IFNγ、PDGF等细胞因子与 HSC-T6细胞作用，观察细胞因子对 decorin 表达的调节作用。旨在为探讨decorin在肝纤维化形成机制中的作用提供理论依据，为肝纤维化治疗提供新思路。一．Decorin对L-02和HSC-T6体外增殖的影响互中文纷召 Decorin是一种与生长抑制活性密切相关的蛋白多糖分子，能够控制多种来源的细胞增殖。对肝脏组织细胞的作用尚未见报道。我们通过decorin与正常人肝细胞株（L心2）及大鼠肝星形细胞株（HSC＊6）体外共孵育，进行细胞计数和心掺入量测定，观察decorin对这些细胞分裂增殖的影响，通过流式细胞仪分析 DNA含量观察其对细胞周期的影响。结果表明 5叶卜g／ml decorin 作用4—6天后，与对照组相比在相同培养条件下细胞增殖数量及速度降低，以 10 pg／ffil作用更强，并且随作用时间延长而明显（P＜0刀1人作用48小时可使细胞’＊－＊dR掺入量比对照组减少18．29％（P＜O．05），’＊－Leu掺入量无明显改变，提示对细胞DNA合成有影响。Decorin作用后，G／G；期细胞百分率比对照增加19石3％和29．08％（P＜0刀1）石期细胞百分率比对照降低18．45％和Zo．98 ％（P＜0刀1X G。／M期细胞减少甚至消失。细胞经20ug／ml decorin作用 6天，台盼蓝染料排斥实验表明细胞活力在 90％以上，说明 decorin在测试条件下对所用细胞无细胞毒性作用，其细胞数量低于对照是由于细胞受decorin作用所致。结果表明decorin能够抑制肝细胞和肝星形细胞的体外增殖，可能与细胞 G；期阻滞以及抑制细胞DNA合成有关。Decorin对细胞生长有负反馈调节作用。二．Decorin诱导L心2细胞和HSC16细胞词亡的研究肝组织损伤启动HSC 由一种静止的富含维生素A的表型转化为活化的肌纤维母细胞样（MFBLC），与静止状态细胞相比，后者具有更高的增殖活力并能大量合成细胞外基质。逆转HSC的活化表型或减少HSC的数量可以减少 ECM成分的过度沉积。我们以decorin为诱导剂，观察decorin在体外对L．02 细胞和HSC16细胞凋亡的诱导作用。我们的实验从多方面表明 decorin在 20－40卜g／ml浓度作用后可使 HSC16 和L－02细胞发生凋亡。Decorin与L－02和HSC16细胞体外共同孵育后，细胞出现了凋亡特征性改变，贴壁细胞变圆、缩小、脱落，台盼蓝染料排斥试验表明这些细胞是活细胞；染色质浓缩，聚集呈新月形或马蹄形，形成凋亡小体；
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2000
【分类号】：R575.202

【参考文献】