Syk调控HPS病理性血管新生作用的研究

发布时间：2020-06-22 02:53

【摘要】：目的:以往研究表明肝肺综合征(hepatopulmonary syndrome,HPS)的疾病机制与肺内病理性血管新生导致通气/血流(V/Q)比例失调,肺内动静脉分流以及氧气扩散障碍有关。研究者发现脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)参与内皮细胞的迁移、增殖以及血管发生。本研究旨在探讨Syk在HPS大鼠肺中的表达变化及其与HPS病理性血管新生的关系,并探究Syk调控HPS病理性血管新生的相关机制。方法:1.分组及CBDL大鼠模型构建采用大鼠CBDL(Common bile duct ligation,CBDL)模型模拟人HPS病理发生,假手术(Sham)组大鼠为正常大鼠,然后取肺组织用于病理切片观察和后续试验,取动脉血用于检测动脉血气。(1)未干预实验大鼠分组:成年健康SD大鼠40只,随机分成四组(n=10)即:Sham组,胆总管结扎术后一周(CBDL1W,1W)组,胆总管结扎术后三周(CBDL3W,3W)组,胆总管结扎术后五周(CBDL5W,5W)组。CBDL1W组大鼠在建模后1W取材,CBDL3W组在建模后3W取材,Sham组和CBDL5W组大鼠在建模后5W取材。(2)干预实验大鼠分组:成年健康SD大鼠30只,随机分成三组(n=10)即:Sham组,CBDL5W组,R788干预(R788)组。R788组大鼠在建成CBDL大鼠模型后每天腹腔注射R788(20mg/Kg)并饲养至第五周取材;Sham组和CBDL5W组大鼠在建模后每天注射等量生理盐水并饲养至第五周取材。2.检测Syk及下游p-Erk1/2和p-Akt在CBDL大鼠肺中表达的水平qPCR和Western blot法分别检测Syk、Erk1/2(Mapk3/Mapk1)及Akt在各组大鼠肺中mRNA的表达,以及Syk、p-Erk1/2和p-Akt在CBDL大鼠肺中蛋白水平的表达。3.检测Syk及下游p-Erk1/2和p-Akt在CBDL大鼠肺中的表达和定位利用免疫组化和免疫荧光可观察目的蛋白表达分布的特点,从而对Syk的表达进行定位。结果:1.CBDL大鼠肺大体外观、血气分析及病理学改变Sham大鼠肺正常,而CBDL鼠肺外观可见淤血点和坏死病灶。动脉血气显示与Sham大鼠比较,CBDL大鼠PaO_2降低和A-aDO_2升高(P0.05)。HE染色观察可见CBDL大鼠肺结构混乱,伴炎性细胞浸润,肺泡间隔增厚,并且CBDL大鼠肺微血管直径较Sham组有增宽(P0.05)。2.Syk在CBDL大鼠肺中的表达改变(1)与Sham相比,Syk、Erk1/2(Mapk3/Mapk1)及Akt mRNA水平在CBDL大鼠肺中的表达显著升高,升高趋势呈时间依赖性(P0.05);(2)与Sham相比,CBDL大鼠肺Syk、p-Erk1/2及p-Akt蛋白表达明显升高,其趋势在3W组和5W组更显著(P0.05)。3.Syk在CBDL大鼠肺中的表达和定位(1)免疫组化结果观察到Syk表达在肺微血管内皮细胞,且Syk、p-Erk1/2及p-Akt在CBDL大鼠的表达量显著高于Sham组(P0.05);(2)用CD34阳性率代表平均微血管密度(Mean microvessel density,MVD)发现,CBDL大鼠的平均血管密度显著高于Sham组(P0.05);(3)免疫荧光观察到Syk定位于肺内微血管,CBDL组肺内微血管数目多于Sham组(P0.05)。4.Syk抑制剂R788抑制Syk表达,下调p-Erk1/2和p-Akt并减少新生血管(1)与CBDL 5W相比,R788组大鼠肺外观及病理改变得到改善,肺微血管直径减小(P0.05),PaO_2升高和A-aDO_2下降(P0.05);(2)与CBDL 5W相比,R788组Syk、p-Erk1/2及p-Akt蛋白活性表达下降(P0.05),并且平均微血管密度(MVD)也显著下降(P0.05);(3)荧光镜观察到R788组新生血管数目少于CBDL 5W组(P0.05)。结论:1.以上研究结果显示,在HPS病理性血管新生的进程中,Syk表达上调并促进和激活了p-Erk1/2和p-Akt的活性表达,导致肺微血管内皮细胞增殖和迁移并形成新生血管;2.Syk抑制剂R788抑制了Syk在肺微血管的表达,同时也下调了p-Erk1/2和p-Akt的表达,从而从分子机制上抑制了肺内血管新生并改善HPS氧合。
【学位授予单位】：遵义医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R575;R563
【图文】：

大鼠,对比曲线,血气分析,行为观察

2.1.1 术后行为观察Sham 组大鼠进食较多，较活泼，体重随喂养时间增加。CBDL 大鼠饮食较差，活动减少，鼠毛较乱光泽差，瘦弱，耳朵呈弱黄色。2.1.2 腹主动脉血气分析相较于 Sham 组，3W 组及 5W 组 PaO2有所下调，A-aDO2则上升（P<0.05）(见表 3，图 1)。表 3 CBDL 组大鼠与 Sham 组血气分析的结果比较(n=150, x ±s)Sham 组 1W 组 3W 组 5W 组PaO2（mmHg） 96.32±2.31 88.65±2.86 78.69±1.62*75.62±1.15*A-aDO2(mmHg） 8.10±1.43 13.21±1.38 20.01±0.89*22.67±0.71*注：相比于 Sham 组，*P < 0.05

外观,病灶,点状

遵义医科大学硕士学位论文艾祥发2.1.3 大鼠肺大体外观及病理学观察（1）Sham 大鼠肺外观和 CBDL 鼠肺外观的比较大鼠肺外观可见 Sham 大鼠肺红润，无出血点和坏死病灶；而 CBDL 大鼠肺观察到淤血点和坏死病灶。1W 组在下肺段可见点状病变，病灶相对少，病变轻微；3W组可见双侧肺组织弥漫性散在点状病变，病变较重；5W 组则双肺多处点状及融合坏死病灶，病变极为严重（见图 2）。

【相似文献】