AQP9在非酒精性脂肪肝中作用机制的研究

发布时间：2020-06-23 11:30

【摘要】： 目的:探讨在油酸诱导的脂肪变性肝细胞模型中AQP9(Aquaproin-9)的表达和意义以及p38 MAPK(p38 mitogen-activted protein kinase)信号传导通路对AQP9表达的调节作用及意义,进一步探讨AQP9在非酒精性脂肪肝中的作用及可能的调节机制。 方法:正常成人L-02肝细胞株,用含10%小牛血清的1640培养基传代培养。采用免疫细胞化学方法观察正常肝细胞株L-02中AQP9的表达部位。采用MTT法摸索建立模型所需的最适宜的油酸浓度,并用该浓度的油酸诱导正常肝细胞株L-02建立肝细胞脂肪变模型。另外在模型组中加入p38 MAPK的阻断剂SB203580。分为正常对照组(C组),模型组(M组),和阻断剂组(B组)。当油酸作用肝细胞24h、48h、72h后采用油红O染色观察细胞内的脂滴的积聚情况。并检测各组细胞内TG、FFA、甘油含量。RT-PCR法检测各组细胞内AQP9 mRNA的表达变化。Western blot法检测各组细胞内AQP9,总p38 MAPK,磷酸化p38 MAPK蛋白的表达变化。 结果:成功建立了油酸诱导的L-02肝细胞株脂肪变性的模型。油红O染色光学显微镜观察对照组细胞内未见肝细胞脂肪变,细胞排列紧密,边缘清晰,细胞核清晰可见。模型组在培养24h后可见少量脂肪变细胞, 72h细胞内聚集的脂滴数量最多,部分融合成较大的脂滴,脂肪变性程度最重。免疫细胞化学的结果显示AQP9的阳性产物在正常肝细胞株L-02中表达比较丰富,主要位于肝细胞的细胞膜上,而细胞浆和细胞核中无表达。M组和B组TG、FFA、甘油含量在各时相点较C组明显增高(p0.01)。其中M组增高最为显著,与B组比较,差异有统计学意义(p0.05)。M组AQP9 mRNA和蛋白的表达均一致上调,与C组相比有显著差异(p0.01),B组AQP9 mRNA和蛋白较C组表达上调,但上调幅度低于M组,差异有统计学意义(p0.05)。M组和B组p38 MAPK总蛋白较C组,差异均无统计学意义(p0.05),M组磷酸化p38 MAPK蛋白较C组表达上调,差异有统计学意义(p0.01),B组中磷酸化P38 MAPK蛋白较C组无明显变化(p0.05),但表达显著低于M组,差异有统计学意义(p0.01)。 结论:采用油酸诱导L-02肝细胞株能够成功制作培养的肝细胞脂肪变模型。在肝细胞脂肪变模型中AQP9随肝细胞脂肪变性程度加重表达逐渐增加,阻断p38 MAPK信号传导通路后,AQP9的表达较模型组降低,肝脂肪变性程度降低,由此可见AQP9可能参与了肝细胞的脂代谢及脂肪变性的形成,且p38 MAPK信号传导途径对在肝细胞脂肪变性模型中AQP9的表达有调节作用。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R575.5
【图文】：

图 1. 各组肝细胞中 AQP9 mRNA 的表达2. M 组：24h 3. M 组：48h 4. M 组：72h 5. B 组：24h 6. B 组：48h 7. B 组表 8 AQP9 mRNA 在培养肝细胞中的表达（积分吸光度 A）0h 24h 48h 72h.12±0.02 —— —— ———— 0.29±0.03* 0.56±0.05* 0.79±0.08*—— 0.20±0.02#0.39±0.05** 0.59±0.06***p、**p<0.01，#p<0.05；与 M 组比较，**p<0.050.81M组 B组

图 2. 各组肝细胞中 AQP9 蛋白的表达. M 组：24h 3. M 组：48h 4. M 组：72h 5. B 组：24h 6. B 组： 可见 M 组 p38 MAPK 总蛋白的表达较 C 组没有明显有明显变化，各时相点于 C 组比较没有统计学的意各时相点 p38 MAPK 总蛋白较 C 组和 M 组均无明显0.05）(见表 9)。图 3.各组肝细胞 t-p38 MAPK 蛋白的表达

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本文编号：2727260