乙肝病毒X蛋白对凋亡蛋白PDCD5表达的实验研究

发布时间：2020-06-29 18:43

【摘要】：[目的] 建立以及鉴定转基因细胞L02/HBX ,在获得阳性克隆细胞后,通过RT-PCR,western-blot对PDCD5的mRNA与蛋白的检测,研究乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein, HBx)对凋亡蛋白PDCD5的表达。 [方法] (1)复苏及培养L02细胞,应用G418筛选L02细胞,得到细胞最低致死浓度。 (2)建立转染HBx基因的L02 (L02/HBX)细胞系,并通过RT-PCR,western-blot进行鉴定,确定HBx基因转染成功。 (3)通过Real-time PCR和Western Blot检测转染HBx基因后PDCD5mRNA和蛋白表达; [结果] (1)复苏并培养L02细胞,经G418筛选得知,当G418浓度在500-700ug/ml时,L02细胞全部死亡;当G418浓度在500ug/ml以下时,L02细胞均可存活。所以经过试验得出L02细胞的最低致死浓度为500ug/ml。 (2)将HBx基因转入L02肝细胞中,以500ug/ml G418筛选出转染HBx的阳性克隆L02细胞。以RT-PCR和western-blot检测HBx mRNA和蛋白的表达,确保成功建立转染HBx基因的L02 (L02/HBX)细胞系。 (3)转染HBx基因的L02细胞中PDCD5 mRNA和蛋白中的表达水平上调。 [结论] HBx上调凋亡蛋白PDCD5的表达进一步显示了其同细胞凋亡的关系是非常复杂的,可能对细胞凋亡具有双重调节作用。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R512.62
【图文】：

结 果度的确定 培养约 2 周，在 500-700μg/ml 范围内 L02 细胞全部的内尚有活细胞，得出致死 L02 细胞的 G418 的最g/ml的G418的选择培养基中培养细胞2周，转染的L0团块存活，而对照组细胞组全部死亡。（图1）

Westernblot检测L02/HBx细胞和对照细胞中HBx蛋白的表达.1:β-actin

【参考文献】

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本文编号：2734202