核转录因子-κB在实验性肝纤维化过程中的意义及水飞蓟宾抗肝纤维化作用机制的研究

发布时间：2020-07-21 08:04

【摘要】： 【目的】研究核转录因子-κB在实验性肝纤维化过程中在肝脏的表达、分布及意义,探讨肝纤维化的发病机制。 【方法】雌性Wistar大鼠70只,体重相近(220g±20g),随机分为正常组(n=6)、肝纤维化模型组(n=32)和PDTC组(n=32),后两组各自又被随机分为1周,2周,4周和6周组(每组n=8)。PDTC组各组大鼠在给40%CCl_4的同时给予PDTC(150mg/kg/d)灌胃。各组动物按设计在1周末、2周末、4周末和6周末实验结束时,用乙醚麻醉,在无菌无热源条件下,进行腹主动脉采血和肝组织取材。常规HE染色观察肝脏病变,天狼猩红胶原染色、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量测定观察肝纤维化程度,产色基质偶氮法鲎试剂定量测定血浆内毒素,赖氏法测定血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT),TBA法检测肝组织丙二醛(MDA)的水平,免疫组化法测定NF-κB和ED2在各组肝脏中的表达,原位杂交和Western-blot检测肝纤维化过程中CTGF在肝脏的表达。 【结果】肝纤维化模型组与正常对照组比较:(1)肝纤维化模型组血浆内毒素含量从第2周开始显著升高,以后呈递增趋势,于第6周时达最高值;肝组织NF-κB表达从第2周开始显著升高,呈递增趋势,6周时达最高;CTGF表达从第4周开始明显升高,第6周达最高,且两两都呈正相关,CTGF表达升高滞后于血浆内毒素含量升高;(2)免疫组化结果显示:NF-κBp65在正常肝组织中少量表达于中央静脉周围的肝细胞胞浆内,在模型肝组织可见程度不等的细胞质和(或)细胞核表达,主要分布于纤维化区、肝窦区、血管壁及部分胆管细胞、变性的肝细胞也可见阳性染色;ED2表达在正常对照组沿肝血窦少量散在分布,纤维化模型组阳性信号明显增多,主要分布在增生的纤维组织及纤维间隔,在肝实质内也有少量分布,阳性信号随着实验的进程呈递增趋势,且阳性细胞胞浆丰富、体积变大,外形为星形、多角形和不规则形。PDTC组与模型组相比较:(1)血浆内毒素含从第2周末起,显著高于同期模型组,第4周达到最高值(P＜0.05),第6周末开始回降,但仍显著高于正常对照组(P＜0.05),与同期模型组无显著性差异;(2)肝组织NF-κBp65和CTGF表达显著低于同期纤维化模型组(P＜0.05),且二者呈正相关(r=0.815,P＜0.01);(3)PDTC组血浆内毒素含量与NF-κBp65和CTGF表达均无相关性;(4)ED2表达也明显减少。 【结论】 1.内毒素可能通过激活NF-κB通路上调CTGF的表达,从而加速肝纤维化的发生和发展。 2.内毒素可能通过NF-κB活化枯否氏细胞,从而参与肝纤维化的发生和发展。 3.PDTC有明显的抗肝纤维化作用。 【目的】观察水飞蓟宾(Silybinin)在大鼠实验性肝纤维化过程中抗肝维化作用及其可能的机制。 【方法】雌性Wistar大鼠70只,随机分为正常对照组(n=5)、肝纤维化模型组(n=33)和水飞蓟宾治疗组(n=32),后两组各自再随机分为1周、2周、4周、6周组(n为6～11)。肝纤维化模型组以40%CCl_4造成化学性肝损伤;水飞蓟宾治疗组注射40%CCl_4的同时以水飞蓟宾50 mg/kg/d灌胃。各组动物(也包括正常对照组)按设计分别于给药后1周、2周、4周、6周末模型形成后,在乙醚麻醉、无菌无热源条件下,行腹主动采血和肝组织取材进行病理学观察。用Western-blot和原位杂交方法检测各组肝脏结缔组织生长因子(CTGF)的表达;测定各组血浆内毒素(ET)含量,同时也测定羟脯氨酸(Hyp)、丙二醛(MDA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的水平。 【结果】肝纤维化模型组和水飞蓟宾治疗组与正常对照组比较,各项指标均有显著升高,且ET含量升高先于CTGF;与肝纤维化模型组比较,水飞蓟宾治疗组肝脏病理学损伤性改变有明显的减轻,血浆ET、ALT水平以及肝组织MDA、Hyp含量均有显著的降低,CTGF表达也明显的下调。 【结论】水飞蓟宾可有效地改善实验性肝纤维化程度,其机制可能与其降低肠源性内毒素血症、下调CTGF的表达有关。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R575.2;R285
【图文】：

根据目的条带的值与内参照p一actin的值之比行半定量分析，然后进行统计学处理，结果表明在正常肝组织有少量CTGF表达，肝纤维化过程中肝组织CTGF的表达随着Ca4损伤周期延长而逐渐升高，与正常对照组比较从第4周起有统计学意义(图7)(尸<0.05)。PDTC组与模型组同期相比CTGF表达从第2周末起显著减少(P<0.05)，见(表2)，(图5、7)。正常对照模型Iw模型ZW模型4W模型 6WPDTCIWPDTCZWPDTC4WPDTC6W乍煦绝敷尸像落思毖罗气三照然竺拼愁泛三巴思岔户一，竺黑烹黑罗一CTGF，臼脚翻...口，.口......峭...，.......侧....，......

山西医科大学项士学正常对照组大鼠肝脏几乎末检测到CTGFmRNA阳性表达(图13D);纤维化CTGFmRNA阳性表达主要分布在胞浆，多见于肝星状细胞和汇管区、纤维间隔中，间隔分布的梭形间质细胞表达为主，少数平滑肌细胞、胆管上皮细胞以及血管内皮细可表达，在炎症区的肝细胞也偶见表达，CTGF表达量纤维化模型组明显高于正常(尸<0.05)，且与肝纤维化的程度呈正相关(图13E)。水飞蓟宾治疗组(4周、6周)与组同期相比cTGF表达显著减少(P<0.05)，见表3，图n、图12、图13Fo正常对照纤维化模型1周模型2周模型4周模型6周水飞蓟宾治疗lw治疗Zw治疗4W治疗6w，..目口口...侧丫一一，旅麟域娜栩口口响...曰...目.护

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 王永堂,鲁秀敏,蒋建新,李关荣,伍亚民,李春穴;内毒素肝损伤过程中枯否细胞NF-κB和AP-1活性变化及其生物学意义[J];生命科学研究;2002年03期

2 张文颉;曹定睿;;氯胺酮对内毒素小鼠肺泡巨噬细胞核因子-κB活化的影响[J];中国药物与临床;2009年S1期

3 王磊,于丽萍,窦科峰;内毒素致枯否细胞中NF-кB的激活及其意义[J];宁夏医学院学报;2003年04期

4 陈小莉;林建东;;雷米普利对大鼠急性肺损伤时肺组织核因子-кВ表达的影响[J];内科急危重症杂志;2006年06期

5 冼海涛;阮少川;蔡立华;曾晖;郑惊雷;邓见玲;姚华国;;辛伐他汀对内毒素所致脓毒症大鼠肾组织NF-κB、iNOS表达的影响[J];广东医学院学报;2010年01期

6 高晓玲;李建强;刘卓拉;;胆红素对内毒素肺损伤大鼠中性粒细胞肺浸润的抑制作用[J];临床医药实践杂志;2007年05期

7 万梅,凌亦凌,王殿华;内毒素诱导兔肺动脉平滑肌iNOS生成中NF-κB作用的探讨[J];中国应用生理学杂志;1999年02期

8 高卉;白育庭;周燕红;李军;;褪黑素对烧伤脓毒症大鼠肝脏核因子-κB表达的影响[J];实用医药杂志;2008年08期

9 顾建军;孙华;;脂多糖诱导大鼠心肌细胞NF-κB、IκB-α的表达及意义[J];中国微循环;2006年04期

10 张步升;陈子英;;体外循环术后SIRS的防治进展[J];山东医药;2009年08期

相关会议论文 前10条

1 李鑫;马晓春;;血必净注射液对脂多糖诱导大鼠肾脏微血管内皮细胞组织因子表达的影响及机制探讨[A];第三届重症医学大会论文汇编[C];2009年

2 丁小强;刘春风;;NF-κB在急性缺血性肾损伤中的作用[A];中华医学会肾脏学分会2004年年会暨第二届全国中青年肾脏病学术会议专题讲座汇编[C];2004年

3 胡泰洪;蒋祥虎;蒋跃明;周敏;徐敏;朱锐;杨玲;;肝纤维化大鼠肝组织中NF-κB及ERK-1mRNA的表达[A];全国第2届中西医结合传染病学术会议暨国家中医药管理局第1届传染病协作组会议论文汇编[C];2008年

4 梁华平;夏浩;徐祥;韩健;;严重多发伤患者血清对RAW264．7细胞NF-κB的刺激活性与其结局相关[A];全国危重病急救医学学术会议论文汇编[C];2007年

5 韩晶岩;;内毒素引起的微循环障碍及中医药的改善作用[A];中国中西医结合学会微循环2009学术大会会议指南及论文摘要[C];2009年

6 靳艳巧;程贤u&;;高沸醇木质素衍生物对内毒素的吸附性能研究[A];2006年全国功能材料学术年会专辑[C];2006年

7 华海婴;樊予惠;朱琳;;川芎嗪对肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白及核因子-κB的影响[A];第十届全国中药药理学术会议论文集[C];2007年

8 蒋三员;李景新;唐荣德;张健民;;蛇伤药酒抗毒抗菌作用的实验研究[A];2008年广东省中医热病、急症、中西医结合急救、危重病、灾害医学学术会议学术论文集[C];2008年

9 王飞;夏照帆;陈旭林;贾一韬;;血管紧张素Ⅱ受体1拮抗剂ZD7155对内毒素诱导急性肺损伤小鼠肺脏炎症因子的影响[A];第八届全国烧伤外科学年会论文汇编[C];2007年

10 王金春;孙锋;宋利春;闻霞;;内毒素预处理对急性局灶脑缺血大鼠的脑功能保护作用研究[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年

相关重要报纸文章 前10条

1 蔡慧丽;严防注射用生物制剂内毒素污染[N];中国医药报;2006年

2 孙凤霞;辨治肠源性内毒素血症[N];健康报;2006年

3 黄每裕;板蓝根加冕内毒素“清道夫”[N];健康报;2007年

4 ;对付“春季病”有四招[N];吉林农村报;2006年

5 城;内毒素活性试验方法获批[N];医药经济报;2003年

6 韦辰;过了春节要及时清理体内垃圾[N];大众科技报;2006年

7 汪承柏;中西医结合诊治慢性重型肝炎[N];中国中医药报;2003年

8 陈志元;不吃药，照样清除“体内垃圾”[N];民族医药报;2007年

9 王有国;痢疾杆菌自述[N];家庭医生报;2006年

10 黄每裕;板蓝根可清除内毒素[N];中国医药报;2007年

相关博士学位论文 前10条

1 樊毫军;腹腔或静脉注射全氟化碳对大鼠急性肺损伤预防作用的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年

2 伏建峰;2’，5，6’，7-四羟基二氢黄酮醇的定向分离及其拮抗细菌脓毒症的生物学活性评价[D];第三军医大学;2008年

3 凌宁生;基于现代中药的胃肠安丸的系统研究[D];天津大学;2007年

4 刘骏峰;内皮细胞生物反应器在猪脓毒血症伴多脏器功能障碍综合征中的应用[D];复旦大学;2008年

5 苗晋锋;卡介菌多糖核酸（BCG-PSN）对内毒素（LPS）诱发实验性乳腺炎影响的研究[D];南京农业大学;2008年

6 张德志;四环素对激素联合内毒素所致骨坏死的预防研究[D];第四军医大学;2006年

7 崔晓辉;硫化氢在大鼠内毒素休克发生发展中的作用及其对一氧化氮和一氧化碳的影响[D];河北医科大学;2007年

8 李晓东;解毒化瘀方对内毒素血症大鼠肝线粒体能量代谢影响[D];湖北中医学院;2006年

9 姚军;活化Notch1对宫颈癌细胞增殖的影响及与NF-κB间的串话作用[D];武汉大学;2007年

10 郭毅斌;白鲜皮抗内毒素的物质基础及其作用机制研究[D];第三军医大学;2007年

相关硕士学位论文 前10条

1 韩雪霖;肝脂消煎剂对脂肪肝大鼠血浆内毒素水平与肝组织NF-κB含量的影响[D];辽宁中医药大学;2007年

2 韩静倩;内毒素及其信号传导通路与银屑病的相关研究[D];天津医科大学;2006年

3 纪晨光;梗阻性黄疸患者肠黏膜IL-6、NF-κB、ICAM-1的表达及其意义[D];河北医科大学;2008年

4 刘石龙;NF-κB和iNOS基因表达在大鼠重症急性胰腺炎肝损伤中作用的实验研究[D];南昌大学;2009年

5 陈云艳;姜黄素衍生物FM0815对脓毒症模型的防治作用研究[D];福建医科大学;2009年

6 吴曼;Toll样受体9在肾小球肾炎中的作用及干预研究[D];吉林大学;2007年

7 张磊;黄连素对重症急性胰腺炎大鼠血浆LPS和TNF-α的影响及意义[D];佳木斯大学;2007年

8 梁炳松;脑缺血预处理后NF-κB、ICAM-1动态表达及其意义研究[D];广西医科大学;2008年

9 赵凤兰;黄芪注射液对急性期川崎病外周血单个核细胞核转录因子表达干预的研究[D];南昌大学;2008年

10 姜靖;CHF患者外周淋巴细胞NF-κB活化及其对卡维地洛干预的反应[D];第三军医大学;2006年

本文编号：2764137