不同类型幽门螺杆菌对GES-1细胞Cx32、Cx43表达及GJIC功能的影响

发布时间：2020-07-24 13:34

【摘要】： 第一部分幽门螺杆菌CagA基因3’端多态性与胃十二指肠疾病的关系 目的探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori)细胞毒素相关基因(CagA基因)3’端可变区序列特征及其与胃十二指肠疾病的关系。 方法湖南地区有明显上消化道症状患者235例,其中慢性胃炎(CG)57例,胃溃疡(GU)62例,十二指肠溃疡(DU)70例,胃癌(GC)46例。于胃镜检查时用灭菌活检钳取胃窦组织1块,分离培养出H.pylori89株,用PCR法对上述菌株的CagA基因扩增及测序,根据CagA基因羧基端EPIYA重复序列的不同,将CagA阳性菌株分为东亚型和西方型两种类型,并通过生物信息学软件进行多重序列比对和相似性分析。 结果H.pylori培养阳性率为37.9%(89/235),其中H.pylori CagA阳性者占91.7%(77/84),GU组、DU组和GC组CagA阳性率高于CG组,其差异有统计学意义(P0.05)。77株H.pylori CagA基因3’端均具有3个EPIYA重复序列,其中第2个EPIYA序列存在3种突变型,占18.2%(14/77)。H.pylori CagA基因3’端序列特征以东亚型为主,占88.3%(68/77),东亚型的CagA阳性菌株在GU组、DU及GC组高于CG组(P0.05)。所有东亚型CagA阳性菌株CagA序列特征类似于Yamaoka报道的A型。 结论(1)湖南地区H.pylori CagA阳性菌株以东亚型为主,均具有3个EPIYA重复序列,第2个EPIYA(EPIYA-B)存在3种突变型；(2)东亚型CagA+H.pylori感染与消化性溃疡和胃癌的发生密切相关。 第二部分不同类型幽门螺杆菌对GES-1细胞Cx32、Cx43及GJIC功能的影响 目的观察不同类型幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori)对人胃粘膜上皮细胞(GES-1)间隙连接蛋白(Connexin,Cx) 32和43的表达及其细胞间隙连接通讯功能(gap junction intercellular communication, GJIC)的影响,探讨与Cx32、Cx43表达及GJIC功能异常有关的H.pylori菌株类型。 方法将临床培养分离的不同H.pylori菌株类型包括东亚型CagA+H.pylori、西方型CagA+H.pylori及CagA-H.pylori与GES-1细胞共培养24h及48h,对照组不加H.pylor培养24h及48h。采用间接免疫荧光方法及计算机图像分析技术检测GES-1细胞Cx32、Cx43表达,划痕标记荧光染料示踪技术(SLDT)检测GES-1细胞GJIC功能,四唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖情况。 结果(1)GES-1细胞Cx32、Cx43表达改变：对照组24h和48h Cx32、Cx43表达阳性率均为100%,表达强度48h较24h增强(P0.05); CagA-H.pylori组24h和48h Cx32表达阳性率分别为100%与98.5%,与对照组比较差异无统计学意义(P0.05),但48h表达强度较对照组降低(P0.05),Cx43 48h表达阳性率及24h和48h表达强度均低于对照组(P0.05)；西方型CagA+H.pylori组24h和48h Cx32表达阳性率分别为100%与93.5%,Cx43表达阳性率分别为100%与88.0%,其48h表达阳性率及表达强度均低于对照组和CagA-H.pylori组(P0.05)；东亚型CagA+H.pylori组24h和48h Cx32表达阳性率分别为100%与85.50%,Cx43表达阳性率分别为100%与74.0%,其48h表达阳性率及24h和48h表达强度均低于对照组、CagA-H.pylori组和西方型CagA+H.pylori组(P0.05)。(2)GJIC功能改变：对照组划痕标记荧光染料向邻近细胞传递4-5列；CagA-H.pylori组24h和48h荧光染料向邻近细胞传递3列,其荧光扩散平均细胞数均低于对照组(P0.05)；西方型CagA+H.pylori组24h和48h荧光染料分别向邻近传递2列和1列细胞,其荧光扩散平均细胞数低于对照组和CagA-H.pylori组(P0.05)；东亚型CagA+H.pylori组24h荧光染料向邻近传递2列细胞,48h荧光染料局限于划痕旁的单列细胞,其荧光扩散平均细胞数均低于对照组和CagA-H.pylori组及西方型CagA+H.pylori组。(3)细胞增殖情况：CagA-H.pylori组细胞增殖与对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)；西方型CagA+H.pylori组24h及48h细胞增殖在细菌/细胞比例100：1组和200：1组均高于对照组(P0.05),且200：1组较100：1组增高更明显(P0.05)；东亚型CagA+H.pylori组24h及48h细胞增殖在细菌/细胞比例100：1组和200：1组均高于对照组(P0.05),且200：1组较100：1组增高更明显(P0.05),但48h 400：1组细胞增殖明显低于对照组(P0.05)。 结论(1) H.pylori下调GES-1细胞Cx32、Cx43表达,降低细胞GJIC功能,并以CagA+H.pylori菌株特别是东亚型CagA+H.pylori菌株更明显；(2) H.pylori下调GES-1细胞Cx32、Cx43表达的作用随共培养时间的延长而增强；(3) H.pylori对GES-1细胞的促增殖作用与毒力因子CagA有关,东亚型CagA+H.pylori低浓度时促进细胞增殖,高浓度时抑制细胞增殖。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R57

【引证文献】

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1 卿晨;不同类型CagA~+H.pylori对GES-1细胞Cx32、Cx43mRNA表达的影响及机制初探[D];中南大学;2011年

本文编号：2768916