乳源免疫调节肽（PGPIPN）防治酒精性脂肪肝的研究

发布时间：2020-08-02 06:09

【摘要】：目的研究乳源免疫调节肽（PGPIPN）对酒精性脂肪肝（AFL）动物及细胞模型的防治作用，探讨乳源免疫调节肽对酒精性脂肪肝的保护作用及可能的机制。方法 1.体内实验 60只昆明种雄性小鼠，随机均分为对照组、模型组、护肝片（0.3g/kg）组、PGPIPNⅠ组、Ⅱ组和Ⅲ组。采用梯度酒精灌胃的方法建立小鼠酒精性脂肪肝（AFL）模型,造模的同时给予药物干预，共12周。实验结束后，处死小鼠，收集血清和肝脏。测定小鼠肝指数(LI)、脾指数(SI)、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）及高密度脂蛋白（HDL-C）和肝组织中甘油三酯（TG）、丙二醛（MDA）含量，超氧化歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）含量和三磷酸腺苷(ATP)含量；常规HE染色和特染油红O染色观察肝组织脂肪变性情况。RT-PCR测各组小鼠肝组织ATPase6、ACC、PPAR-γ mRNA表达；Western Blot检测各组小鼠肝组织PPAR-γ、ACC蛋白的表达水平。 2．体外实验培养人永生化的正常胎肝LO2细胞株，建立酒精损伤细胞模型。采用MTT法筛选酒精诱导LO2脂肪变性的适宜浓度(0.15%、0.3%、0.6%、1.2%、2.4%、4.8%)，选择最适浓度的PGPIPN对其进行干预，光学显微镜观察不同组别油红O染色情况，全自动生化仪检测细胞培养基中ALT、AST酶泄露量，以及各组细胞内TG水平。结果 1、PGPIPN对AFL动物模型的影响：PGPIPN各剂量组均能明显降低AFL小鼠LI和SI水平、血清中ALT和AST的活性，减少血清中TG、TC、LDL-C及HDL-C和肝组织中TG、MDA含量，升高SOD和GSH-PX活性；同时，病理组织学检查结果显示，PGPIPN各剂量组小鼠肝脏中小泡性脂肪变性程度明显减轻。与对照组比较，模型组ATPase6、PPAR-γ mRNA表达降低，ACC表达增强；与模型组比较，PGPIPN各剂量组ATPase6、PPAR-γ mRNA表达升高，ACC表达减弱。与对照组相比，模型组PPAR-γ蛋白表达显著增强，ACC表达减弱；与模型组相比，PGPIPNⅠ组PPAR-γ蛋白表达显著减弱，ACC表达增强。（P＜0.01or P＜0.05） 2、PGPIPN对乙醇损伤LO2细胞的影响：MTT结果显示在一定浓度范围PGPIPN能改善体外LO2细胞的AFL损害。用MTT法筛选出乙醇浓度0.6%为最适浓度。与模型组比较，PGPIPN各剂量组脂肪变性面积随给药浓度的增加而减小； ALT、AST、TG含量均减少。（P＜0.01or P＜0.05）结论 1、PGPIPN可通过提高机体抗氧化能力抵抗AFL所致的氧化应激，维持线粒体的正常功能；抗氧化活性是PGPIPN发挥拮抗AFL的机制之一。 2、PGPIPN抗酒精性脂肪肝的作用可能与其显著减弱ATPase6、PPAR-γ mRNA和PPAR-γ的蛋白水平，以及增强ACC mRNA与蛋白的表达水平有关。 3、PGPIPN对AFL的发生发展有一定的干预作用，对其有一定的防治功效。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R575.5

【共引文献】