基于HCV E2序列保守性评估及B-cell表位预测筛选基因型特异性表位多肽

发布时间：2020-08-03 06:39

【摘要】：背景：丙型肝炎是一种由HCV感染引起的全世界范围的传染病。HCV感染慢性化导致患者肝脏纤维化和肝硬化，甚至肝细胞癌。HCV基因组学，尤其是E2区域序列的高突变率，使得基因分型越来越多样化、HCV及基因分型的检测要求越来越严格，慢性感染者对常规抗病毒治疗应答不佳以及预防HCV感染的疫苗研制工作举步维艰。基于序列的保守性评估和表位预测合成的表位多肽，由于具有高度的保守性及良好的抗原活性，成为当今科学界研究的热点。利用该技术构建合成的HCV保守性表位多肽，在HCV感染性疾病的诊断、治疗及预防的探索研究也已得到广泛开展。目的：基于HCV E2区序列的保守性评估和B-cell表位预测合成表位多肽，分析其与HCV组和对照组血清结合性的差异，筛选基因型特异性表位多肽；基于此类表位多肽预期：建立HCV及基因分型血清学ELISA检测技术；识别此类表位多肽的特异性抗体通过抗原抗体结合，封闭HCV感染人体靶细胞的位点或灭活病毒，起到有效的抗病毒作用；通过诱导动物产生中和抗体，而成为预防HCV感染的候选免疫原，为制备新型肽类疫苗提供依据。方法：本研究利用MEGAv5.05软件，对NCBI protein数据库中HCV1a、1b、4d基因型的各40条E2序列进行保守性评估及B-cell表位预测和表位设计，得到此3种基因型特异及共有的保守性B-cell表位序列，化学合成表位多肽。通过ELISA实验，测定4种表位多肽分别与29例HCV感染者及25例非HCV感染者血清结合的OD450值，使用SPSS v20.0软件进行差异性分析，两组间比较应用t/t’检验方法（P＜0.05），明确HCV感染组与对照组数据差异及统计学意义。结果：实验合成4条HCV B-cell表位多肽，分别为1a特异性序列DC-13（434-DTGWLAGLFYYHK-446）、1b特异性序列HC-13（434-HTGFLAALFYAKS-446）、4d特异性序列NC-13（434-NTGFLASLFYTHK-446）和共有序列FC-9（447-FNSSGCPER-455）。ELISA实验及数据分析显示：DC-13、NC-13和FC-9与HCV感染组血清结合OD450值均高于对照组，差异具有统计学意义；HC-13与HCV-1b感染组血清结合OD450值高于HCV-2a感染组，差异具有统计学意义，但与HCV-1b感染组和对照组的血清结合OD450值差异无统计学意义。结论：实验合成4条HCV B-cell表位多肽，即1a、1b、4d型特异性表位多肽及共有表位多肽；其中，1a、4d型特异性表位多肽及共有表位多肽与HCV感染者血清结合性均高于非HCV感染者，1b型特异性表位多肽与HCV1b感染者血清结合性明显高于HCV2a感染者。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R512.63

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