乙型肝炎病毒前C区1896位变异与HBV宫内感染的关系及胎盘细胞免疫研究

发布时间：2020-08-15 07:54

【摘要】：乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染是严重危害人类健康的公共卫生问题。其中母婴宫内传播已成为乙肝病毒感染最主要的途径。阻断乙刑肝炎病毒母婴传播成为防止新发乙肝病人的主要措施。既往的很多研究表明,母体e搞原阳性和HBV DNA高滴度是导致胎儿宫内感染的主要原因。而近年来的临床观察发现,在e抗原阴性的情况下也易发生乙肝病毒宫内感染。HBV前C区1896 G→A变异可导致HBeAg阴性的HBV感染。该现象提示除e抗原阳性和HBV DNA高载量等因素之外,应有HBV前C区1896变异所致e抗原阴性的孕妇发生的HBV宫内感染。胎盘感染是引起乙肝病毒宫内传播的高危因素,通过检测胎盘T淋巴细胞、Hofbauer细胞及IL2水平,可反映受HBV感染后胎盘细胞免疫的情况。本课题对HBV前C区1896 G→A变异与乙肝病毒宫内传播的相关性进行研究,并对HBV前C区1896变异经胎盘途径传播的机制进行了探讨。 第1部分乙肝病毒前C区1896G→A变异与HBV宫内感染的关系研究 目的：探讨孕妇HBV前C区18966→A变异与宫内感染的关系。 方法： 将携带乙肝病毒的孕妇及其新生儿294对分为两组(HBV前C区1896G→A变异组149对,非变异组145对),采用荧光PCR法检测孕妇静脉血HBV1896位点变异；应用酶联免疫吸附法(ELISA)和病毒核酸扩增法(免疫荧光定量PCR方法)对孕妇静脉血和新生儿外周血进行HBV血清学标志物和HBV DNA载量的检测。 结果： 149例HBV1896G→A变异组孕妇外周血检测HBV DNA载量1g值均值为数(6.781±0.894),非变异组HBV DNA载量1g值的均值为数(2.706±0.789),HBV DNA载量1g值均值检验有显著性差异(t=10.7991,p0.01)。HBV1896G→A变异组HBeAg阴性孕妇宫内感染率15.71%(11/70),而同组HBeAg阳性者13例发生宫内感染率为16.46%(13/79),两者比较无显著差异(X2=0.02579,p0.05)。变异组孕妇HBV1896G→A变异组孕妇149例,HBV1896G→A非变异组孕妇145例,其新生儿外周血检测HBsAg阳性或(和)HBV DNA阳性分别23例和11例。变异组孕妇发生宫内感染率宫内感染率为15.44%(23/149),明显高于非变异组的宫内感染率7.59%(11/145),差异有显著性(X2=4.4279,p0.05)。 结论： 在携带乙型肝炎病毒的孕妇中,前C区变异18966→A阳性者比无前C区变异者伴有更高水平的HBV DNA。HBV变异导致的HBeAg低表达并未降低宫内感染率。乙肝病毒前C区18966→A变异增加了HBV宫内感染率。 第2部分：乙肝病毒前C区1896G→A变异孕妇的胎盘细胞免疫研究 目的：探讨发生前C区1896G→A变异的HBV经胎盘途径传播机制。 方法： 将研究对象61名携带乙肝病毒孕妇分为2组：(1)32名HBV前C区18966→A变异的孕妇为研究组(又称为变异组)。(2)29名HBV前C区18966→A非变异的孕妇为对照组(又称为非变异组)。收集其胎盘组织标本,用免疫组织化学法分别检测胎盘组织中细胞囚子白介素2(IL2)的表达以及T淋巴细胞和Hofbauer细胞(每张切片随机选取18个放大400倍视野作细胞计数,然后取平均值)。 结果：HBV前C区18966→A变异的胎盘中CD3阳性的T淋巴细胞和CD68阳性的巨噬细胞数(Hofbauer细胞)显著增加。研究组和对照组CD3阳性的T淋巴细胞平均计数分别为：39.2±1.185和9.6±2.503。两组CD68阳性的巨噬细胞相应的平均计数：研究组22.7±4.5227,对照组9.5±2.173,方差分析结果显示两项指标研究组与对照组比较均有显著差异,分别为(t=19.1958,p0.01),(t=8.31889,p0.01)。胎盘组织中的白介素2(IL2)阳性率变异组与非变异组分别为78.12%和13.79%。变异组IL2的表达增强,两组比较有统计学意义(X2=25.2454,p0.01)。 结论： 乙肝病毒发生前C区1896G→A变异后,胎盘感染HBV机率增加。出现乙肝病毒发生前C区1896G→A变异后,T淋巴细胞和Hofbauer细胞介导的细胞免疫可能有所增强。
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R512.62;R714.2
【图文】：

绒毛间质(X100

质疏松可见绒毛水肿、绒毛问质纤维化和纤维素沉积以及绒毛间质血管丰富，合体细胞聚集(图1)，炎性细胞浸润，并以淋巴细胞为主(图2)，蜕膜样细胞脂肪变性(图3)。32例变异组中有4例发生新生儿HBV宫内感染，而这4例的胎盘组织中只有l例表现出胎盘炎性反应。29例非变异组中有2例发生HBV宫内感染，且这2例胎盘组织中无胎盘炎性反应的表现。图1绒毛间质(x100倍)图2绒毛间质(x100倍)图3蜕膜样细胞 (x100倍)

两组胎盘组织中HBsAg和/或HBcAg检出率有显著性差异 (xZ=4.9206，p<0.05)。棕褐色阳性信号阳性信号出现频率及强度由高至低依次为滋养细胞层，间质细胞层，血管内皮细胞。(图4一图 6HBcAg的表达，图7一图 9HBsAg的表达)图4滋养细胞层HBCAg的表达 (x100)图5间质细胞层HBcAg的表达(x100)图6血管内皮细胞HBeAg的表达 (x100)图7滋养细胞层HBSAg的表达(K400)图8间质细胞层HBSAg的表达(x4OO)图9血管内皮细胞HBsAg的表达 (x400)二.两组胎盘组织中CD3阳性的T淋巴细胞和CD68阳性的巨噬细胞计数值1.胎盘组织中的CD3阳性细胞散在分布于胎盘间质，也可见于绒毛间隙的母血中及绒毛毛细血管腔中，阳性信号多位于细胞胞质和细胞胞膜，少数位于细胞胞核(图10一图12)。

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本文编号：2793831