异甘草酸镁对肝细胞模拟缺血再灌注损伤的保护作用和机制研究

发布时间：2017-03-31 15:06

  本文关键词：异甘草酸镁对肝细胞模拟缺血再灌注损伤的保护作用和机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 观察异甘草酸镁（Magnesium isoglycyrrhizinate，MgIG）对肝细胞模拟缺血再灌注后细胞增殖、凋亡、炎症的调控作用，探讨MgIG对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及作用机制，为将来MgIG在肝脏缺血再灌注损伤中的应用提供实验基础和理论依据。 方法： 体外培养人肝细胞株HL-7702，当细胞处于对数生长期时：1.将细胞接种至96孔板，随机分为缺血再灌注组（ischemia-reperfusion group，IR组）及MgIG预处理组，待细胞贴壁后分别用不同浓度(0、10-2、10-1、1、10、100mg/ml)的MgIG预处理细胞24h，模拟缺血6h、再灌注4h后应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测MgIG对缺血再灌注肝细胞增殖活力的影响；2.将HL-7702细胞接种至培养板、培养瓶或载玻片上，随机将细胞分为IR组、低浓度组、中浓度组、高浓度组，待细胞贴壁后，分别用含有不同浓度的MgIG（0、0.1、1、10mg/ml）预处理24h，模拟缺血6h、再灌注4h后，取细胞或细胞的上清液用作以下实验：①应用吖啶橙/嗅化乙啶（AO/EB）染色观察细胞的凋亡情况；②用相应的试剂盒分别检测各组培养液中ALT、SOD、MDA、IL-1β、TNF-α的水平；③应用RT-qPCR法检测各组bcl-2、Bax、NF-ΚB基因mRNA的表达量。 结果： 1.MTT法结果表明：与IR组（0.227±0.013）相比，MgIG在0.1-10mg/mL浓度范围内能提高缺血再灌注HL-7702细胞的A值（0.285±0.017、0.320±0.008、0.341±0.019），差异有统计学意义（P0.01）；浓度过低时（0.01mg/ml），与IR组（0.227±0.013）相比，虽然也能提高缺血再灌注HL-7702细胞的A值（0.235±0.014），但差异无统计学意义（P0.05）；浓度过高时（100mg/ml），观察发现细胞全部漂浮，无活细胞； 2.AO/EB染色结果显示，低浓度组细胞凋亡率（0.5763±0.0405）低于IR组（0.7124±0.0581），差异具有统计学意义（P0.05），，中、高浓度组细胞凋亡率（0.2866±0.0619、0.1261±0.0439）分别低于IR组（0.7124±0.0581），差异具有统计学意义（P0.01）； 3.低、中、高浓度组上清液ALT含量（21.27±1.58、17.03±0.87、14.79±1.54u/L）分别低于IR组（24.65±1.22u/L），差异具有统计学意义（P0.01）； 4.低、中、高浓度组SOD含量（16.99±1.25、20.22±1.35、23.76±0.99u/mL）分别高于IR组（12.52±1.80u/mL），差异具有统计学意义（P0.01）； 5.低、中、高浓度组MDA含量（9.84±1.14、5.64±0.87、3.93±0.59nmol/mL）分别低于IR组（11.89±0.82nmol/mL），差异具有统计学意义（P0.01）； 6.低、中、高浓度组IL-1β含量（33.34±1.30、30.51±0.76、28.35±1.24pg/ml）、TNF-α含量（58.75±4.05、40.04±4.74、29.22±2.31pg/ml）分别低于IR组（37.07±1.18pg/ml）、（66.43±3.28pg/ml），差异具有统计学意义（P0.01）； 7.RT-qPCR结果显示低、中、高浓度组bcl-2基因mRNA的表达量（3.350±0.151、9.279±0.350、15.290±0.756）分别高于IR组（0.928±0.068），差异具有统计学意义（P0.01），低、中、高浓度组Bax、NF-ΚB基因mRNA的表达量（0.743±0.035、0.265±0.065、0.119±0.019）、（0.597±0.062、0.248±0.067、0.141±0.029）分别低于IR组（0.945±0.063）、（0.962±0.034），差异具有统计学意义（P0.01）。 结论： MgIG能减轻肝细胞缺血再灌注的损伤，其作用机制可能与MgIG能提高肝细胞增殖活力、抑制脂质过氧化、抑制炎症反应、减轻肝细胞凋亡等多种因素有关。
【关键词】：异甘草酸镁 肝细胞 缺血-再灌注 凋亡 炎症
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R575
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 材料与方法13-23
• 2.1 实验材料13-14
• 2.1.1 细胞株13
• 2.1.2 实验仪器13-14
• 2.1.3 实验药品及试剂14
• 2.2 试剂配制14-15
• 2.2.1 细胞培养主要试剂配制14-15
• 2.2.2 异甘草酸镁溶液的配制15
• 2.2.3 MTT 溶液的配制15
• 2.3 实验方法15-23
• 2.3.1 细胞复苏、培养及传代15
• 2.3.2 细胞计数15-16
• 2.3.3 缺血再灌注模型的建立16
• 2.3.4 MTT 比色法观察 MgIG 对缺血再灌注损伤肝细胞活力的影响16
• 2.3.5 MgIG 对缺血再灌注肝细胞凋亡、炎症的影响16-22
• 2.3.6 统计学分析22-23
• 第3章 结果23-31
• 3.1 细胞形态学的变化23-24
• 3.2 MgIG 对缺血再灌注肝细胞活力的影响(MTT 法)24-25
• 3.3 MgIG 对 IRI 肝细胞凋亡影响（AO/EB 双重染色）25-26
• 3.4 MgIG 对 IRI 肝细胞 ALT、SOD、MDA、IL-1β、TNF-α的影响26-29
• 3.5 MgIG 对 IRI 后肝细胞 bcl-2、bax、NF-κB 表达的影响29-31
• 第4章 讨论31-35
• 4.1 模拟缺血再灌注模型的选择31
• 4.2 MgIG 的药理作用31-32
• 4.3 MgIG 保护肝细胞缺血再灌注损伤的机制32-35
• 4.3.1 MgIG 促进肝细胞增殖，增强肝细胞活力的作用32
• 4.3.2 MgIG 的抗氧化及脂质过氧化作用32
• 4.3.3 MgIG 的抗炎作用32-33
• 4.3.4 MgIG 抗细胞凋亡的作用33-35
• 第5章 结论与展望35-36
• 5.1 结论35
• 5.2 展望35-36
• 致谢36-37
• 参考文献37-39
• 攻读学位期间的研究成果39-40
• 综述40-47
• 参考文献45-47

【参考文献】

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本文编号：279744