强的松在土三七诱导的肝窦阻塞综合征中的治疗作用及其机制探讨
发布时间:2020-08-25 14:43
【摘要】:第一章土三七诱导小鼠HSOS模型的建立与评价 目的:采用PBS、野百合碱、环磷酰胺、吗替麦考酚酯、云南三七、土三七小鼠灌胃法,比较各组小鼠HSOS发生率,以求成功构建稳定可复制的HSOS建模方法,并给予综合评价。 方法:160只清洁级健康雌性昆明小鼠随机分为六组:PBS正常对照组、野百合碱组、环磷酰胺组、吗替麦考酚酯组、云南三七组和土三七组。分别予以野百合碱灌胃7天,环磷酰胺隔日灌胃30天,PBS、吗替麦考酚酯、云南三七、土三七灌胃30天后处死小鼠。检测血液中血细胞计数、肝功能情况;测肝重/体重;留取肝组织行HE染色、Masson染色,用修改后的Deleve评分标准进行病理学评分。 结果: 1.野百合碱组、环磷酰胺组和土三七组分别有23只、5只和24只小鼠成模,PBS正常对照组、云南三七组和MMF组小鼠未诱导出HSOS。 2.与PBS正常对照组比较,野百合碱组及土三七组小鼠体重有增加(P0.05),其中以土三七组小鼠体重增加更为明显;环磷酰胺组小鼠体重明显下降(P0.05);而MMF组和云南三七组小鼠体重与PBS正常对照组无明显差异(P0.05)。 3.与PBS正常对照组对比,野百合碱组和土三七组小鼠血细胞中RBC及PLT计数下降,WBC计数增加(P0.05);云南三七组RBC计数稍有增加,WBC和PLT计数稍有减少,但差异并无统计学意义(P0.05);环磷酰胺组和MMF组小鼠均出现三系减少,且以环磷酰胺组减少得更为明显(P0.05)。 4.与PBS正常对照组比较,各模型组小鼠肝指数、ALT、AST、 TBIL均明显升高,ALB明显下降(P0.05);MMF组小鼠肝功能较PBS正常对照组亦存在一定程度损害,但明显轻于环磷酰胺组(P0.05);云南三七组小鼠肝功能变化情况与正常对照PBS正常对照组比较无明显差异(P0.05)。 5.根据修改后的Deleve评分标准,野百合碱组小鼠多为轻-中度HSOS改变,土三七组及环磷酰胺组小鼠多表现为中-重度HSOS。 结论: 1.野百合碱、环磷酰胺、土三七均能成功诱导小鼠HSOS模型,其中环磷酰胺法成模率低于野百合碱和土三七灌胃法,云南三七和MMF未能成功诱导出小鼠HSOS模型。 2.野百合碱、土三七诱导的小鼠HSOS模型均符合人类HSOS病理改变,其中野百合碱可诱导急性HSOS模型,土三七可诱导慢性HSOS模型,为HSOS的进一步研究提供了理想动物模型。 3.与野百合碱比较,土三七诱导的HSOS动物模型在进行药物建模机制、药物干预研究方面更为理想。 4.与土三七比较,云南三七未能成功诱导出小鼠HSOS模型,说明云南三七无明显肝毒性,临床用药相对安全。 5.与环磷酰胺比较,吗替麦考酚酯的骨髓抑制及肝毒性均较轻,是相对安全的免疫抑制剂。 第二章强的松对土三七诱导HSOS的防治疗效观察 目的:探讨不同剂量强的松对土三七诱导小鼠HSOS的防治作用。 方法:115只清洁级健康雌性昆明小鼠随机分为四组:PBS正常对照组、土三七组、低剂量强的松干预组(5mg·kg-1·d-1)和高剂量强的松干预组(10mg·kg-1·d-1)分别灌胃30天后处死小鼠。检测血液中血细胞计数、肝功能情况;测肝重/体重;留取肝组织行HE染色、Masson染色,用修改后的Deleve评分标准进行病理学评分;并用免疫组织化学法和RT-PCR法检测肝组织的TGF-β1和CTGF表达水平。 结果: 1.土三七组、低剂量强的松干预组和高剂量强的松干预组分别有24只、5只和7只小鼠成模,PBS正常对照组无一成模。 2.与土三七组比较,两组强的松干预组小鼠RBC及PLT计数稍有增加,WBC计数减少,ALB下降明显轻于土三七组,TBIL增高程度亦低于土三七组(P0.05),ALT和AST无明显差异,不同剂量干预组间无明显差异(P0.05);低剂量强的松干预组小鼠肝指数明显下降(P0.01),但高剂量强的松干预组小鼠肝指数改变不明显(P0.05)。 3.根据修改后的Deleve评分标准,土三七组小鼠多表现为中-重度HSOS,强的松干预组多表现为轻-中度,无重度HSOS发生,其中以低剂量组平均评分更低(P0.05)。 4.肝组织TGF-β1和CTGF表达:免疫组化和RT-PCR均显示两组强的松干预组与土三七组比较,TGF-β1和CTGF表达明显减少(P0.05),不同剂量干预组间无明显差异(P0.05)。 结论: 1.强的松干预可降低土三七诱导的小鼠HSOS发生,改善小鼠一般情况和肝功能水平,减轻肝窦内皮细胞损害及肝窦纤维化等肝脏病理组织学损伤。 2.与高剂量强的松(10mg·kg-1·d-1)比较,低剂量强的松(5mg·kg-1·d-1)干预土三七诱导的HSOS小鼠模型,在改善肝窦纤维化方面并无显著差异,但就血药浓度及远期副作用考虑,5mg·kg-1·d-1可能为更为理想的防治剂量。 3. TGF-β1和CTGF的表达水平可反映HSOS的病情程度、病理改变及临床转归等情况,对观察疗效、评估预后等有重要意义。 第三章强的松对土三七诱导HSOS防治机制的探讨 目的:研究强的松对炎性因子及致纤因子的表达及调控机制,从ECM的合成与降解、参与肝窦纤维化形成的细胞因子角度探讨强的松作为HSOS治疗药物的可能性及作用途径和机制,为HSOS的治疗提供进一步的理论和实验依据。 方法:115只清洁级健康雌性昆明小鼠随机分为四组:PBS正常对照组、土三七组、低剂量强的松干预组(5mg·kg-1·d-1)和高剂量强的松干预组(10mg·kg-1·d-1)分别灌胃30天后处死小鼠。应用RT-PCR法检测肝组织中MMP-1、TIMP-1、MCP-1、TNF-α、IL-1β和NF-κBp65mRNA的表达,western blot法检测TNF-α、TGF-β1和CTGF蛋白的表达。 结果: 1. RT-PCR结果:土三七组小鼠肝组织中MMP-1、TIMP-1、 MCP-1、TNF-α、IL-1β、NF-κBp65mRNA的表达较PBS正常对照组显著增高(P0.01),强的松干预后肝组织中NF-κBp65、TNF-α、IL-1β、 MCP-1mRNA的表达较模型组下降(P0.05)。与PBS正常对照组比较,土三七组MMP-1/TIMP-1显著减小(P0.01),强的松干预后MMP-1/TIMP-1较土三七组明显上升(P0.05)。不同剂量干预组间无明显差异(P0.05)。 2.Western blot结果:土三七组小鼠肝组织中TNA-α、TGF-β1和CTGF蛋白的表达较PBS正常对照组显著增高(P0.01),强的松干预后肝组织中TNA-α、TGF-β1和CTGF蛋白的表达较模型组下降(P0.05),且不同剂量干预组间无明显差异(P0.05)。 结论:强的松在土三七诱导HSOS模型过程中,可能通过下调核转录因子NF-κB的表达,调控趋化蛋白MCP-1和炎症因子TNF-α和IL-1p,进而减少HSC的活化,抑制TGF-β1、CTGF、TIMP-1合成,促进MMP-1降解ECM,降低SEC损害及ECM沉积,减轻炎症和纤维化,起到有效防治HSOS的作用。
【学位授予单位】:中南大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R575
本文编号:2803826
【学位授予单位】:中南大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R575
【参考文献】
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本文编号:2803826
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