吡格列酮对小鼠实验性结肠炎的治疗作用及其机制研究

发布时间：2020-08-26 07:19

【摘要】： 背景与目的: 吡格列酮是过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-γ的配体,近年来研究表明PPAR-γ是治疗炎症性肠病(IBD)的潜在靶点,它经配体激活后通过抑制NF-κB的活化,减少促炎症细胞因子的转录及表达,从而下调过度的免疫炎症反应。TLRs信号通路的激活可活化NF-κB,从而诱导促炎因子的产生,这在IBD的发病中起重要作用。然而在IBD发病中抗炎的PPAR-γ信号通路和促炎的TLRs信号通路之间的相互关系目前所知甚少。为此本文观察了吡格列酮对DSS诱导的小鼠实验性结肠炎的治疗作用,以及在这一过程中PPAR-γ,TLRs信号通路的重要因子TLR2、TLR4、MyD88、TLRs信号通路负性调控因子SIGIRR、NF-κB的活化标志物NF-κB p65的表达变化,研究PPAR-γ信号通路和TLRs信号通路在IBD中的相互关系,从一新的角度探讨吡格列酮对IBD的作用机制。 方法: ⑴实验分组: ①对照组:未建模的小鼠仅给予药物赋形剂0.5%CMC;②模型组:建模的小鼠仅给予药物赋形剂0.5%CMC;③柳氮磺胺吡啶(SASP)组:建模的小鼠给予100mg/kgSASP+0.5%CMC;④吡格列酮高剂量(PG1)组:建模的小鼠给予100mg/kg吡格列酮+0.5%CMC;⑤吡格列酮中剂量(PG2)组:建模的小鼠给予50mg/kg吡格列酮+0.5%CMC;⑥吡格列酮低剂量(PG3)组:建模的小鼠给予25mg/kg吡格列酮+0.5%CMC。每组10只小鼠。 ⑵DSS诱导小鼠结肠炎模型的建立和药物治疗: BALB/c小鼠自由饮用3%DSS溶液7天,然后停止饮用DSS溶液改用蒸馏水10天,建立小鼠慢性结肠炎模型,模型建立成功标志为有半稀便、腹泻、大便隐血阳性和肉眼血便中的任一症状。将饮用蒸馏水的小鼠作为对照组。在造模第2天开始分别按上述分组的药物剂量灌胃,每天1次直至实验结束。处死小鼠,取标本待测。实验共18天。 ⑶各项指标的观察和检测: ①观察每天各组小鼠体重、疾病活动指数DAI;②肉眼观察小鼠结肠大体形态改变,HE染色观察病理组织学改变;③RT-PCR方法检测小鼠结肠组织中TLR2、TLR4、MyD88、SIGIRR和PPAR-γmRNA的表达;④免疫组织化学染色检测小鼠结肠组织中TLR2、TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白的表达。 结果: ⑴小鼠体重和DAI积分改变 ①除对照组外各组小鼠在实验第5天体重显著下降,在第10天及第15天体重体重逐渐回升。在实验第5、10、15天模型组和各药物组体重下降百分比均高于对照组(P0.001,0.005,0.05);在实验第5天SASP组和吡格列酮高、低剂量组体重下降百分比均低于模型组(P0.05),在实验第10天吡格列酮低剂量组体重下降百分比均于模型组和SASP组(P0.05),在实验第15天SASP组体重下降百分比显著低于模型组和吡格列酮中剂量组(P0.05),吡格列酮高剂量组体重下降百分比低于模型组和吡格列酮中、低剂量组(P0.05,0.005,0.001)。 ②各组小鼠DAI积分在实验第5、10天有显著差异,对照组的DAI积分显著低于模型组和各药物组(P0.001);实验第5天SASP组和吡格列酮高剂量组显著低于模型组(P0.001,0.05),吡格列酮高剂量组显著低于吡格列酮中剂量组(P0.05);在实验第10天吡格列酮低剂量组显著低于模型组、SASP组和吡格列酮中剂量组(P0.05)。在实验第15天各组小鼠DAI积分虽有差异,但无统计学意义(P0.05)。 ⑵小鼠结肠病理学改变 ①小鼠肠黏膜大体形态:正常对照组小鼠结肠黏膜无充血、水肿,模型组可见明显结肠黏膜充血、水肿,SASP组和吡格列酮组结肠黏膜充血、水肿较模型组轻;各组结肠肉眼观察均未见明显的溃疡和糜烂。 ②小鼠结肠病理组织学严重度评分:无论是结肠炎症程度、病变深度还是隐窝破坏程度在正常对照组均显著低于其它各组(P0.001,0.005);在SASP和吡格列酮高、中剂量组均显著低于模型组(P0.001,0.005,0.05);炎症程度在吡格列酮高剂量组还显著低于吡格列酮低剂量组(P0.05)。 ⑶小鼠结肠黏膜TLR2表达:TLR2 mRNA的表达在各组小鼠结肠黏膜内无显著差异(P0.05);但是,TLR2蛋白的表达在正常对照组显著低于模型组和各药物组(P0.001),在SASP组和吡格列酮高、中剂量组显著低于模型组(P0.05),在吡格列酮低、中、高剂量各组,呈剂量依赖地下降,但无统计学意义(P0.05)。 ⑷小鼠结肠黏膜TLR4表达:TLR4 mRNA的表达在模型组显著高于对照组和各药物组(P0.001,0.01),在吡格列酮低、中、高剂量各组,呈剂量依赖地下降,但无统计学意义(P0.05),且各药物组与正常对照组无显著差异(P0.05);TLR4蛋白的表达在正常对照组显著低于模型组和各药物组(P0.001,0.005),在SASP组和吡格列酮高、中剂量组显著低于模型组(P0.01,0.05),在吡格列酮低、中、高剂量各组,呈剂量依赖地下降,高剂量组显著低于低剂量组(P0.05)。 ⑸小鼠结肠黏膜MyD88的表达:MyD88 mRNA的表达在模型组显著高于对照组、SASP组和吡格列酮高剂量组(P0.001,0.05),在吡格列酮低、中、高剂量各组,呈剂量依赖地下降,但无统计学意义(P0.05),且各药物组与正常对照组无显著差异(P0.05)。MyD88蛋白的表达在正常对照组显著低于模型组和各药物组(P0.001),在SASP组和吡格列酮高、中剂量组显著低于模型组(P0.05),在吡格列酮低、中、高剂量各组,呈剂量依赖地下降,但无统计学意义(P0.05)。 ⑹小鼠结肠黏膜SIGIRR mRNA的表达:SIGIRR mRNA的表达在对照组显著高于模型组、SASP组和吡格列酮低、中剂量组(P0.005,0.01,0.05),各药物组与模型组无显著差异(P0.05),在吡格列酮低、中、高剂量各组,呈剂量依赖地增加,但无统计学意义(P0.05)。 ⑺小鼠结肠黏膜PPAR-γmRNA的表达:PPAR-γmRNA的表达在对照组显著高于模型组和吡格列酮低、中剂量组(P0.005,0.01,0.05),在SASP组显著高于模型组(P0.05),在吡格列酮低、中、高剂量各组,呈剂量依赖地增加,但无统计学意义(P0.05)。 ⑻小鼠结肠黏膜NF-κB p65蛋白的表达:NF-κB p65蛋白的表达在正常对照组显著低于模型组和各药物组(P0.001,0.005,0.01),在SASP组和吡格列酮高剂量组显著低于模型组(P0.05),在吡格列酮低、中、高剂量各组,呈剂量依赖地下降,但无统计学意义(P0.05)。 结论: ⑴DSS诱导的小鼠实验性结肠炎肠黏膜PPAR-γ和SIGIRR的表达降低,TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB p65表达增加,提示TLRs/NF-κB信号通路过度激活和它的负性调控机制的减弱及PPAR-γ信号通路的抑制参与了IBD的致病。 ⑵PPAR-γ配体吡格列酮可减轻小鼠结肠的症状和病理组织的炎症和损伤,有望成为治疗IBD的新途径。 ⑶给予吡格列酮后小鼠结肠组织中TLR2、TLR4、MyD88和NF-κB p65的表达显著下降,并与结肠炎症的缓解有关,提示PPAR-γ配体可能通过抑制TLRs/NF-κB的激活减轻组织炎症反应。 ⑷给予吡格列酮后小鼠结肠组织中SIGIRR和PPAR-γ的表达有剂量依赖性上调,提示PPAR-γ配体可能通过SIGIRR和PPAR-γ对TLRs/NF-κB信号通路进行负性调控。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R574.62
【图文】：

图 3.2 各组小鼠结肠的大体形态注：A 为对照组，B 为模型组，C 为 SASP 组，D 为 PG1 组3.3 小鼠结肠组织病理变化表 3.2 各组小鼠结肠病理组织学严重程度评分组别 n 炎症 病变深度 隐窝破坏对照组 10 0.50±0.53 0.00±0.00 0.00±0.00模型组 10 6.70±2.41a4.10±2.23a4.90±2.23aSASP 组 10 3.70±1.95a,c2.10±0.57b,d2.60±1.65a,dPG1 组 10 3.20±1.93b,c,g2.20±1.23a,d2.70±1.34a,dPG2 组 10 3.90±1.79a,d2.70±1.25a,f3.00±1.16a,ePG3 组 10 5.10±2.38a3.20±1.87a3.70±1.64aF=11.41P<0.05F=9.59P<0.05F=11.69P<0.05注：a 为 P<0.001 vs 对照组；b 为 P<0.005 vs 对照组；c 为 P<0.001 vs 模型组；d 为 P<0.005 vs 模型组；e

如表 3.2 所示，无论是结肠炎症程度、病变深度还是隐窝破坏程度在正常对照组均显著低于其它各组(P<0.001，0.005)；在 SASP 和吡格列酮高、中剂量组均显著低于模型组(P<0.001，0.005，0.05)；炎症程度在吡格列酮高剂量组还显著低于吡格列酮低剂量组(P<0.05)(图 3.3-3.8)。

如表 3.2 所示，无论是结肠炎症程度、病变深度还是隐窝破坏程度在正常对照组均显著低于其它各组(P<0.001，0.005)；在 SASP 和吡格列酮高、中剂量组均显著低于模型组(P<0.001，0.005，0.05)；炎症程度在吡格列酮高剂量组还显著低于吡格列酮低剂量组(P<0.05)(图 3.3-3.8)。

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本文编号：2804882