鼠李糖乳杆菌上调肠上皮细胞及小鼠结肠5-羟色胺转运体表达

发布时间：2020-09-10 07:59

　　目的:肠易激综合征(Irritable Bowel Syndrome,IBS)是消化科一种常见的以腹痛、腹胀、腹部不适同时伴有排便习惯和性状改变为主要特点的下消化道疾病,是最常见的一种功能性胃肠病,人群发病率较高,其病情及症状持续反复,严重影响及困扰着患者的身心健康及生活质量。5-羟色胺转运体(serotonin transporte,SERT)是一种跨膜转运蛋白,广泛分布于肠道EC细胞及神经突触前膜上,其作用是将效应部位过多聚集的5-羟色胺(5-hydroxytryp tamin,5-HT)再摄取,从而终止5-HT的作用,并为合成新的5-HT提供底物,在IBS的发病中有着重要的作用。文献报道,SERT基因多态性可影响SERT表达,从而在IBS亚型的发生发展中起作用。然而,除基因本身之外,肠道微生态环境的改变也可能对SERT的表达产生影响。临床上应用益生菌治疗腹泻型及感染后肠易激综合征取得了显著疗效。益生菌是否能够调控SERT表达及其调控机制尚不清楚。鼠李糖乳杆菌LGG(Lactobacillus rhamnosus GG)是临床实验上研究比较多的益生菌之一。本研究通过采用鼠李糖乳杆菌上清液(Lactobacillus rhamnosus GG supernatant,LGG-s)对HT-29和Caco-2细胞及C57BL/6小鼠进行干预,并检测SERTmRNA及SERT蛋白表达情况,探讨鼠李糖乳杆菌上清是否会影响SERT的表达,从而为益生菌缓解IBS的可能的机制提供新的方向。方法:(1)应用3种不同稀释浓度的鼠李糖乳杆菌上清液LGG-s(ATCC53103)和LGG-s(CGMCC1.3724)分别干预HT-29细胞和Caco-2细胞12小时和24小时;(2)将48只雌性C57BL/6小鼠分为4组,一组为对照组,给予正常饮用水,其他三组分别予以未稀释LGG-s(ATCC53103),2倍稀释的LGG-s(ATCC53103)和3倍稀释的LGG-s(ATCC53103)。小鼠处理持续时间分别为1周、2周、3周及4周。每周每组处死3只小鼠取其结肠备用。应用RT-PCR及Western-blot来检测HT-29细胞、Caco-2细胞及小鼠结肠组织的SERT mRNA及SERT蛋白的表达水平。所有数据均采用SPSS21.0统计学软件包进行分析,计量资料用均数±标准差(sx?)来表示;计量资料3组以上组间比较用单因素方差分析,方差齐性时用LSD检验,方差不齐时用Dunnett T3法检验,均以P0.05认为有统计学差异。结果:LGG-s(ATCC53103)干预HT-29细胞和Caco-2细胞24小时,其SERT mRNA和SERT蛋白的表达水平与对照组相比明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。动物实验中,未稀释LGG-s(ATCC53103)组第一周末SERT mRNA水平明显升高,是对照组的9.4倍,差异有统计学意义(P=0.000,P0.05),第二周末SERT mRNA水平快速下降至接近对照组水平;2倍稀释LGG-s(ATCC53103)在前两周和第四周均能上调SERT mRNA的表达,第三周SERT mRNA水平低于对照组水平,差异均有统计学意义(P=0.000,P=0.006,P=0.007,均P0.05)。3倍稀释的LGG-s(ATCC53103)在前3周对SERT mRNA无上调作用,在第4周SERT mRNA水平轻度升高,是对照组的1.6倍,差异有统计学意义(P0.05)。整个实验中,未稀释LGG-s(ATCC53103)对SERT蛋白水平无明显影响,2倍稀释LGG-s(ATCC53103)组的SERT蛋白水平均高于对照组,但稍有波动。而3倍稀释LGG-s(ATCC53103)组,前两周SERT蛋白表达与对照组无明显差异,第三周和第四周明显高于对照组。结论:(1)LGG-s(ATCC53103)能够上调肠道上皮和小鼠肠道组织的SERT mRNA和SERT蛋白的表达;(2)LGG-s(ATCC53103)上调SERT mRNA和SERT蛋白的表达是具有时间依赖性的。
【学位单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：R574
【部分图文】：

扩增曲线,琼脂糖凝胶电泳

RT-PCR扩增曲线

鼠李糖乳杆菌上调肠上皮细胞及小鼠结肠5-羟色胺转运体表达

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电泳,产物,内槽

士学位论文一、对好的琼脂糖凝胶缓慢的灌入内槽玻璃板上，使凝胶基本于室温下放置 30-40min 至完全凝固，拔下梳子，加入 TA，然后将含有凝胶的内槽放于电泳槽中，电泳缓冲液要RT-PCR产物的EP管中加入3ul的6Xloadingbuffer使其混l 的混合物和 DNAMarker 依次加入胶板的小孔内，记住每恒压电泳，样品则由负极向正极方向移动，当电泳条带达泳；毕后，取出凝胶放于凝胶成像仪内，经凝胶成像系统拍的片段大小以确定产物是否正确。基因产物扩增片段(见

【参考文献】