miR-150及其靶点c-Myb在DSS诱导小鼠结肠炎模型及人类溃疡性结肠炎中结肠上皮细胞损伤过程中作用研究

发布时间：2020-10-11 23:34

　　 炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一种胃肠道慢性非特异性炎症性疾病,主要包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn's disease,CD)。IBD的病因和发病机制尚未完全明确,可能与遗传易感性、炎症因子以及环境因素等多种因素之间的复杂的相互作用有关。有研究显示,慢性炎症性肠病与一些参与调控炎症过程和组织重构的基因的表达异常有关。 利用实时定量RT-PCR(real-time quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction, qRT-PCR)技术,我们研究了硫酸葡聚糖钠盐(dextran sulphate sodium, DSS)诱导的小鼠急性溃疡性结肠炎模型中与细胞凋亡有关的microRNA的表达谱。结果显示,DSS处理后的小鼠结肠组织中,miR-150表达剧烈升高,而c-Myb(一种转录因子,同时也是miR-150的靶点)表达显著降低。有趣的是,较之于正常结肠组织,患有UC的人结肠组织中也存在miR-150表达升高而c-Myb表达下调的现象。在DSS处理的小鼠结肠组织中,作为一种受到c-Myb调控的抗凋亡蛋白Bcl-2的减少,也印证了DSS诱导的结肠上皮细胞凋亡的发现。此外,在结肠上皮细胞HT29中转染pre-miR-150,会使得miR-150表达水平剧烈升高,c-Myb和Bcl-2表达水平下降,从而提高了血清饥饿法诱导的细胞凋亡水平。 总之,我们目前的研究提供了miR-150表达升高介导的c-Myb表达下降可能作为DSS诱导的小鼠急性溃疡性结肠炎模型和人类活动期UC中结肠上皮细胞破坏的新的机制的第一个证据。
【学位单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2012
【中图分类】：R574.62
【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
缩略词表
第一章 研究背景综述
    第一节 microRNA的研究进展
        1.1 microRNA的概念与特征
        1.2 microRNA的发现历程
        1.3 microRNA的生物合成及作用机制
            1.3.1 microRNA的生物合成
            1.3.2 microRNA的作用机制
            1.3.3 miRNA与siRNA的区别
        1.4 microRNA的功能意义
        1.5 microRNA的研究方法
            1.5.1 microRNA靶基因的预测
            1.5.2 microRNA的检测方法
        1.6 microRNA研究领域有待解决的问题
    第二节 microRNA与炎症性肠病(IBD)研究进展
        2.1 microRNA与炎症的关系
        2.2 microRNA和自身免疫性疾病的关系
        2.3 microRNA在IBD患者肠道组织中表达异常
        2.4 microRNA在IBD患者外周血中表达异常
        2.5 microRNA与IBD疾病活动度的关系
        2.6 microRNA与IBD病变部位的关系
        2.7 IBD中pre-miRNA编码区单核苷酸多态性
        2.8 炎症相关癌症中microRNA表达异常
        2.9 总结
第二章 实验部分
    第一节 DSS诱导的小鼠实验性结肠炎模型结肠组织中miR-150表达上调
        1.1 实验材料
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 实验试剂
        1.2 实验方法
            1.2.1 DSS诱导小鼠急性UC模型的建立
            1.2.2 miRNA的qRT-PCR定量检测
            1.2.3 细胞凋亡检测
            1.2.4 数据处理
        1.3 实验结果及分析
    第二节 miR-150及其靶蛋白c-Myb在结肠上皮细胞的破坏和细胞凋亡过程中的作用研究
        2.1 实验材料
            2.1.1 细胞株
            2.1.2 实验试剂
        2.2 实验方法
            2.2.1 miRNA的过表达和干扰
            2.2.2 c-Myc mRNA逆转录
            2.2.3 流式细胞仪检测细胞凋亡：Annexin Ⅴ/PI双染色法
            2.2.4 RNA干扰(RNA interference,RNAi)
            2.2.5 Western Blotting
            2.2.6 数据处理
        2.3 实验结果及分析
    第三节 人类活动期溃疡性结肠炎结肠组织中miR-150表达上调、c-Myb表达下调
        3.1 实验材料
            3.1.1 实验组织
            3.1.2 实验试剂
        3.2 实验方法
        3.3 实验结果及分析
第三章 讨论
参考文献
论文发表情况
致谢

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本文编号：2837289