凉血愈肠汤对大鼠放射性肠炎肠黏膜修复机制研究

发布时间：2020-10-18 02:19

　　 目的 腹盆腔肿瘤的治疗方法有很多种，放射治疗是其中一种最重要方法，但放疗在治疗疾病的同时也会出现一些如放射性肠炎这样的并发症，急性期的表现是消化道出血及腹泻，是由于放射线破坏了黏膜上皮细胞完整性，引起细胞功能发生紊乱；慢性期的表现是瘘管、肠梗阻及溃疡，是由于肠壁硬化造成的。 目前对放射性肠炎的治疗方法包括：①肠粘膜保护剂：如硫糖铝、思密达等。但总体疗效并不确切；②肠外营养：谷氨酰胺及肠外营养具有一定疗效，但费用高昂，且存在导管脓毒血症、肝功能损害、代谢紊乱等并发症；③高压氧治疗：可增加损伤肠道供氧，促进损伤修复，但高压氧治疗需要特殊大型设备，难于在战时条件下迅速、大量配备使用；④內镜及手术治疗：內镜治疗仅限于对症局部止血作用，严重患者最终只能接受手术，切除病变肠段；⑤中医药治疗：在我国传统医学中，针灸及中药汤剂对于胃肠道疾病是一种非常重要的治疗方法。国内已有少数研究报道了中药对放射性肠炎具有较好疗效，能有效缓解各种症状，促进机体康复。但多数限于临床疗效观察，缺乏组织学、细胞学、分子水平的深入研究。本课题拟在既往工作的基础上，进一步建立核辐射肠损伤的大鼠模型，从组织学、分子水平、细胞学三方面研究凉血愈肠汤对放射性肠损伤的治疗作用，明确其作用机制。 方法 1、放射性肠炎模型大鼠的分组及准备 随机将140只雄性SD大鼠按照放射剂量的不同分为4组，A组为正常对照组（n=20）、B组为低剂量照射组(n=40)，给予放射当量为5Gy、C组为中剂量照射组(n=40)，给予放射当量为10Gy、D组即15Gy剂量照射组(n=40)，建成辐射肠损伤模型。 2、分组 造模成功后， B、C、D实验组再随机分为两组，B1、C1、D1组为照射后不给药组，给予蒸馏水灌胃， B2、C2、D2组为照射后给药组，予喂凉血愈肠汤。 3、免疫组织化学方法检测各组大鼠肠上皮细胞PCNA及Ki67的表达情况 通过SP免疫组化试剂盒的操作说明对石蜡切片的PCNA7及Ki67进行染色。 4、Brdu法检测肠上皮细胞的增殖 在各组大鼠处死之前，经腹腔向大鼠注射Brdu溶液，然后按照相同的方法制备石蜡切片，通过免疫组织化学方法对Brdu阳性细胞进行标记。 6、荧光实时定量Real-time PCR法分析各组组织中的炎症因子的表达变化 处死各组大鼠后，取少量组织，用trizol法提取总RNA，用SYBR Green 法检测IL-6、IL-8、IL-1、TNF-ɑ、IL-4、IL-10的表达变化 结果 1、大鼠小肠粘膜上皮细胞修复能力检测 正常肠绒毛根部及肠腺可见大量散在PCNA阳性细胞。模型组的肠绒毛上皮细胞及肠腺上皮的PCNA表达明显减少，凉血愈肠汤给药处理后，肠绒毛上皮细胞及肠腺上皮的PCNA表达较模型对照组明显增多，但是少于正常肠绒毛上皮细胞及肠腺细胞。 2、Brdu检测肠粘膜上皮中处于S期的细胞数量 正常肠绒毛及肠腺可见大量散在Brdu标记的阳性细胞（S期细胞），模型组中Brdu标记的阳性细胞数明显降低，凉血愈肠汤给药处理后，Brdu标记的阳性细胞数明显对照组明显增多，但是少于正常肠绒毛中Brdu标记的阳性上皮细胞。 3、荧光实时定量Real-time PCR法分析各组组织中的炎症因子的表达变化 正常大鼠的肠组织中，IL-6、IL-8、IL-1、TNF-ɑ、等炎症因子表达量很少，模型大鼠中，各种因子的表达量明显增多，凉血愈肠汤给药处理后，模型大鼠肠组织中的IL-4、IL-10的表达量较不给药组明显升高，但是低于正常大鼠的表达量。 结论 凉血愈肠汤可以使受损肠道的黏膜得到修复，原理是使受损肠道的粘膜上皮细胞增殖加速，炎性因子的表达得到遏制，对维持肠道粘膜功能和结构的稳定性能起到良好的作用。
【学位单位】：辽宁医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2013
【中图分类】：R574
【部分图文】：

结果1、在肠上皮细胞中PCNA的表达及其阳性细胞的数量正常的胃肠道黏膜细胞或胃肠道肿瘤组织中，判断细胞增殖的指标是细胞增殖抗原，细胞的增殖程度是通过观察在电镜下呈现PCNA阳性反应的量的多来实现的。镜下显示正常对照组、蒸馏水组及凉血愈肠汤组的空、回肠上皮细的PCNA阳性细胞为棕色，核染色为蓝色，三个组PCNA阳性细胞集中分布于小黏膜层的腺体内，多数是呈棕黄色阳性反应的上皮细胞，少数为阳性反应的绒上皮细胞。通过实验发现凉血愈肠汤组的肠上皮细胞内的PCNA阳性细胞数多蒸馏水组（p<0.05），少于正常对照组（p<0.05）结果见下图1、2及表1。

照及各实验组大鼠肠上皮细胞中的表中PCNA的表达量;B1、B2：5Gy照射组大鼠不:10Gy照射组大鼠不给药及给药组PCNA的表达及给药组PCNA的表达量，**p<0.01。胞中的表达和阳性细胞的计数的应用于评价细胞增殖的一种方法，K胞周期中表达于细胞核[17]，在细胞有丝期，G2期表达，在细胞间期不表达. K比率[19]密切相连。因此，我们检测了、回肠的Ki67的表达情况，来检测肠上蒸馏水组和凉血愈肠汤组的空、回肠上蓝色，三个组Ki67阳性细胞均主要位于

i67在对照及各实验组大鼠肠上皮细胞中的织中Ki67的表达量;B1、B2：5Gy照射组大鼠不2：:10Gy照射组大鼠不给药及给药组Ki67的表达药及给药组Ki67的表达量，***p<0.001。的观察和计数血愈肠汤在放射性肠炎中，对肠上皮细胞。结果显示正常对照组、蒸馏水组和凉血性细胞镜下显示为棕色，胞核为蓝染，B体内，大多数为腺体基底部的上皮细胞。应的绒毛上皮细胞，在10Gy剂量照射组，对于正常大鼠，给予凉血愈肠汤处理之后和正常对照大鼠相比仍然偏低。如图5
【参考文献】

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本文编号：2845653