过表达miR-21通过Smad7促进肝卵圆细胞增殖的研究

发布时间：2020-10-22 04:51

　　 目地:microRNA是一类含22-28个核苷酸的非编码小分子RNA,在转录后水平和翻译水平调控基因的表达过程,参与了许多生理病理过程的调节。肝卵圆细胞(Hepatic ovalcell,HOC)是肝脏的原始兼性多能干细胞,主要分布于肝脏小叶间胆管或Hering管,即终末胆管区域。肝卵圆细胞具备极强的体外自我复制、克隆增殖及分化能力,在肝脏严重损伤或者成熟肝细胞增殖受到抑制的时候,肝再生则主要通过卵圆细胞的增殖与分化来完成。本研究的目的是探讨miR-21在肝卵圆细胞增殖过程中的作用及机制。方法:用慢病毒分别转染大鼠肝卵圆细胞使miR-21的表达增强和抑制,用荧光显微镜观察其转染效率和PCR检测三组miR-21表达情况(空载体组,miR-21增强组,miR-21抑制组),提取转染后的肝卵圆细胞中的蛋白,用Western blotting方法检测三组Smad7蛋白的表达情况,PCR检测三组Smad7 mRNA的表达情况。用cck-8方法检测转染后三组肝卵圆细胞的增殖情况。结果:慢病毒转染肝卵圆细胞后筛选出了稳定的细胞株,PCR结果示miR-21增强组其miR-21表达增强,miR-21抑制组其miR-21表达抑制。Western blotting显示miR-21增强组其Smad7蛋白的表达减少,miR-21抑制组其Smad7蛋白的表达增强。PCR结果示Smad7mRNA的趋势和miR-21表达趋势相一致。结论:过表达miR-21通过Smad7促进肝卵圆细胞增殖过程。
【学位单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R575
【部分图文】：

图２?：?ｃｏｎｔｒｏｌ：空载体慢病毒转染的ＨＯＣ?ｐｒｅ－ｍｉＲ－２１?：?ｍｉＲ－２１增强载体??ａｎｔｉ－ｍｉＲ－２１：?ｍｉＲ－２１－抑制慢病毒载体

?３．３?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ检测三组Ｓｍａｄ７蛋白的表达??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ观察到，如图３所示，相对于空载体对照细胞，ｍｉＲ－２１增强??慢病毒转染的细胞组其Ｓｍａｄ７蛋白的表达减少，ｍｉＲ－２１抑制慢病毒转染的细胞组??其Ｓｍａｄ７蛋白的表达增强。３Ａ：?Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ显示三组Ｓｍａｄ７蛋白显影情况。３Ｂ：??三组Ｓｍａｄ７蛋白表达柱状图。??老ｓ?！??ｉ?／?Ｉ??Ａ?■??Ｓｍａｄ７??ＧＡＰＤＨ??Ｂ?，??）Ｗｌ??ｚ?／?／??／?／?／??图３：?ｓｃｒａｍｂｌｅ：空载体慢病毒转染的ＨＯＣ?ｐｒｅ－ｍｉＲ－２１：?ｍｉＲ－２１增强慢病毒转染??的?ＨＯＣ?ａｎｔｉ－ｍｉＲ－２１：?ｍｉＲ－２１－抑制慢病毒转染的?ＨＯＣ。（＊：尸＜０．０５）??３．４?ＰＣＲ检测Ｓｍａｄ７?ｍＲＮＡ的表达??采用２－ＡＡＣＴ法计算出不同组中Ｓｍａｄ７ｍＲＮＡ的相对表达量，如图４Ａ所示：??ｐｒｅ－ｍｉＲ－２１?组其?Ｓｍａｄ７?ｍＲＮＡ?的表达增强，ａｎｔｉ－ｍｉＲ－２１?组其?Ｓｍａｄ７?ｍＲＮＡ?的表达??降低（与ｍｉＲ－２１的表达图趋势一致）。??１９??

３．５?ＣＣＫ－８检测三组细胞在不同时间点的表迗??三组细胞在２４ｈ，４８ｈ，７２ｈ，?９６ｈ培养后用ＣＣＫ－８试剂检测４５０ｎｍ的吸收波，结??果如图４Ｂ表明ｍｉＲ－２１增强组细胞增殖数量多于ｍｉＲ－２１抑制组的细胞数量，说明??ｍｉＲ－２１过表达可以增强肝卵圆细胞的增殖。??２０??
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本文编号：2851118