激活诱导细胞死亡在乙型肝炎发病机制中的意义

发布时间：2020-10-22 21:08

　　 既往研究表明，非成熟的胸腺细胞若遭遇抗原、抗CD_3单克隆抗体、 植物血凝素（PHA）或糖皮质激素刺激时，通常会发生凋亡。近年来发现 这种现象并不限于非成熟的免疫细胞，同样能在成熟的外周血淋巴细胞中 出现。淋巴细胞经刺激活化后再发生凋亡的现象被称为激活诱导细胞死亡 （activation-induced cell death，AICD）。研究发现20％～30％的反应性T细胞 在同种抗原的再刺激下发生凋亡，这种淋巴细胞经活化增殖到凋亡的现象 被称作本体自杀性或本体自溶性调节（propriocidal or propriolytic regulation）。这种调节可能是T细胞生理性反应机制的一部分，同时也可 能形成一种外周淋巴细胞免疫耐受机制。 细胞免疫对于机体抵抗病毒感染起非常重要的作用，然而病原体如病 毒在巨大的生存压力下也演化出若干能对抗机体免疫的能力。一方面，感 染细胞的凋亡是机体细胞免疫清除病毒感染的一种手段，另一方面，病毒 可利用调节免疫细胞凋亡等手段力求在体内生存、复制及播散。目前已发 现一些病毒能诱导外周血淋巴细胞的凋亡，如人免疫缺陷病毒（HIV）、Ⅰ 型单纯疟疾病毒（HSV-1）、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（LCMV）等。 激活诱导细胞死亡（AICD）现象一方面限制过强的免疫反应对机体造成的 损害，另一方面，AICD引起的外周淋巴细胞免疫耐受可能是病毒得以在 体内长期存在的重要原因。 研究病毒感染时淋巴细胞发生的AICD现象及淋巴细胞的状况对了解 病毒感染慢性化和重型化机理是非常必要的。乙型肝炎病毒（HBV）常致 慢性化和重型化感染，其机制迄今尚未充分阐明，弄清以下问题对揭示乙 型肝炎发病机理具有重要意义：HBV能否诱导外周血淋巴细胞发生凋亡； AICD在HBV感染中的存在情况及意义；HBV感染期间机体淋巴细胞及 其亚群状况；ThllThZ细胞因子在HBV感染中的变化与AICD的关系。为 此，本课题就上述问题进行了系列的研究。主要研究结果及结论如下。 1．乙型肝炎患者外周血单个核细胞凋亡的检测 通过设置不同诱导剂在不同浓度、不同时相诱导PBMC凋亡，以探索慢 性乙型肝炎PBMC发生AICD恰当的诱导剂类型、浓度和时间，实验结果 显示 PHA是一种良好的 AICD诱导剂，PHAo u g／10‘cells处理组接种 培养 72 h对 PBMC凋亡的诱导是恰当的。 分离14例慢性乙型肝炎，6例漫性重型乙型肝炎病人与10例健康献 血员外周血单个核细胞0BMC人 在PHAI的刺激下培养7211后收集细 胞，采用PI染色法经流式细胞仪检测凋亡。以研究AICD现象在乙型肝炎 慢性化和重型化机制中的意义。结果发现，慢性乙型肝炎组PBMC凋亡率 （30．57土13．43％）高于正常对照组PBMC凋亡率（11．45土5．27％）（WO．01）， 高于慢性重型乙型肝炎组 PBMC凋亡率（13．59土 6．44％）（peo．01）；乙型 肝炎HBeAg（＋）组PBMC凋亡率高于正常对照组PBMC凋亡率门．50土 12．25％VSll．45土5．27％，peo．of）。实验显示不同类型的乙型肝炎PBMC 存在不同程度的AICD。 2．朋V阳性血清诱导人外周血单个核细胞凋亡的研究 利用 10名健康献血员外周血分离 PBMC，分为加 HBV阳性血清组和 加健康人血清对照组，经培养72 h后，采用PI染色法在流式细胞仪上检 测细胞凋亡；利用8例慢性乙型肝炎、5例慢性重型乙型肝炎新鲜分离 PBMC、5例健康献血员加 HBV阳性血清培养 72 h后的 PBMC涂片，采 用SP免疫细胞化学染色法检测PBMC HBSAg、HBCAg的表达。研究 HBV对PBMC凋亡的作用。结果发现，加 HBV阳性血清组培养细胞凋亡 率高于加健康人血清组培养细胞凋亡率u9．56土7．03％VS27．57土7．78％， P＜O刀2人 免疫细胞化学染色显示，慢性／慢性重型乙型肝炎患者＊＊＊C与 加 HBV阳性血清培养后的健康人PBMC皆有HBSAg、HBCAg的阳性表达。 结果提示，HBV感染可能具有诱导PBMC凋亡的能力，这可能是形成HBV t＠性感染兔疫耐受的一个重要机制。HBV感染PBMC是否强化诱导AICD， XI 、O 尚需进一步研究加以证明。 3．乙型肝炎患者外周血单个核细胞Fas表达的检测 分离 16例慢性乙型肝炎患者、14例慢性重型乙型肝炎患者和 12例健 康献血员PBMC，利用间接兔疫荧光染色法，通过流式细胞仪检测PBMC Fas的表达以探讨活化诱导细胞死亡（AICD）在乙型肝炎中的发生机制及 意义。结果发现，慢性乙型肝炎组 PBMC Fas表达率u3．31土14．53们 高于正常刑照组 PBMC Fas表达率（39．32土 11．28％）（P＜0．05）和慢性 重型乙型肝炎组 PBMC Fas表达率（37．93土15．89％）（P＜0．of）。结 合第一部分实验，慢性乙型肝炎组PBMC凋亡率＊0．57士13．43肋高于正 常对照组 PBMC凋亡率（11．45土5．27％）（P（．of）和慢性重型乙型肝炎组 PBMC凋亡率（1
【学位单位】：第三军医大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2001
【中图分类】：R512.62
【文章目录】：
英文缩写注释
英文摘要
中文摘要
论文正文 激活诱导细胞死亡在乙型肝炎发病机制中的意义
    第一部分 乙型肝炎患者外周血单个核细胞凋亡的检测
    第二部分 HBV阳性血清诱导人外周血单个核细胞凋亡的研究
    第三部分 乙型肝炎患者外周血单个核细胞Fas表达的检测
    第四部分 慢性重型乙型肝炎肝内淋巴细胞激活诱导细胞死亡现象的探测
    第五部分 乙型肝炎患者淋巴细胞亚群的检测与AICD变化的关系
    第六部分 乙型肝炎患者血清和PBMC培养上清Th1细胞因子（IL-2）与Th2细胞因子（IL-10）的检测
总结
研究中存在的问题及展望
致谢
照片
参考文献
文献综述
    文献综述一 病毒的反防御手段
    文献综述二 细胞凋亡的分子机制及其调控因子
    文献综述三 Th1/Th2细胞平衡与病毒性肝炎
攻读博士学位期间撰写的文章

【参考文献】

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本文编号：2852096