目的:探讨血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)对同种异体骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)移植后在纤维化大鼠肝内定植及治疗肝纤维疗效的影响,为BMSCs临床应用提供实验依据。方法:1.全骨髓贴壁法分离、培养BMSCs,移植前用CM-Dil体外标记BMSCs,免疫荧光法和流式细胞技术鉴定。2.大鼠按0.3ml/100g,每周2次,腹腔注射40%CCl4建模,成模大鼠随机分为对照组(同期假手术+等量注射生理盐水4次,1周1次,n=6)、VEGF组(尾静脉注射Ad VEGF溶液4次,1周1次+门静脉注射生理盐水1次,n=6)、BMSCs组(门静脉移植BMSCs悬液1次+尾静脉注射生理盐水4次,1周1次,n=6)、联合组(门静脉移植BMSCs悬液1次+尾静脉注射Ad VEGF溶液4次,n=6),12周后各组随机取3只用伊文思蓝法检测肝血窦血管通透性,剩余各组大鼠处死取肝脏标本进行HE、Masson、天狼星红染色,免疫荧光检测α-SMA、CollagenⅢ,WB检测TGF-β、α-SMA、ColleganⅢ,RT-q PCR检测Col3α1、IL-6、Vimentin、Twist1、Snail、Slug、E-Cadherin、Occludin反应纤维化程度改变,免疫荧光、WB、RT-q PCR检测肝脏中VEGF和Vcam-1的表达变化,免疫荧光检测经CM-Dil标记的BMSCs肝内定植情况,免疫荧光检测Ki67、PCNA,WB检测CYP3A1、ALB,RT-q PCR检测ALB、G6Pase。结果:四组大鼠肝纤维化相关检测结果均提示,与对照组相比,联合组纤维化改善情况最明显,VEGF组无明显改善,BMSCs组纤维化稍有好转。伊文思蓝结果提示VEGF组和联合组肝内伊文思蓝残留量最高。四组大鼠VEGF和Vcam-1表达量:免疫荧光切片显示VEGF组、联合组的VEGF表达量增加;VEGF组与联合组之间变化不明显,WB结果与免疫荧光相似。RT-q PCR的结果表明,与对照组相比,VEGF组、联合组VEGF基因的表达量增加,(P0.05);不同组间VCAM-1表达量的差异变化与VEGF相似,VEGF组、联合组对比对照组,Vcam-1表达量增加(P0.05)。荧光检测经CM-Dil标记的BMSCs在肝内定植情况:BMSCs组定植数量较少,主要分布于肝内汇管区及纤维隔邻近区域,联合组定植数量较多,在肝实质内分布相对均匀。RT-q PCR检测上皮间质转化相关指标,提示联合组诱导转化相关因子表达下降,抑制转化相关因子表达升高。免疫荧光显示Ki67和PCNA在BMSCs组和联合组中阳性率较对照组增高;联合组中阳性率也比BMSCs组高。WB检测CYP3A1、ALB,BMSCs组、联合组表达量增加,VEGF组未见明显变化;联合组表达量较BMSCs组增高较多。RT-q PCR检测ALB、G6pase:与对照组相比,BMSCs组及联合组表达增加,(P0.05),VEGF组、对照组两组间对比增高较不明显;联合组与BMSCs组相比表达增加,(P=0.063)。结论:1.VEGF可以促进骨髓间充质干细胞在肝纤维化大鼠肝内定植,其机制可能与VEGF可以增加肝血窦内皮通透性及提高内皮细胞Vcam-1的表达有关;2.VEGF可以提高骨髓间充质干细胞治疗肝纤维化大鼠的疗效,提高肝脏再生水平,改善肝功能,其机制可能与VEGF可以促进骨髓间充质干细胞在肝纤维化大鼠肝内定植有关。
【学位单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R575.2
【部分图文】：
遵义医学院硕士学位论文 袁3 结果3.1 BMSCs 的形态学及鉴定3.1.1 BMSCs 形态学观察倒置相差光学显微镜下观察发现，分离出的原代骨髓间充质干细胞在接后 24h-48h 后可贴壁生长（图 1-A），随着传代次数增加，到第三代时，细胞排规则，成规律性漩涡状紧密排列，形态多呈长纺锤形或长梭形。（图 1-B）
遵义医学院硕士学位论文 袁3 结果3.1 BMSCs 的形态学及鉴定3.1.1 BMSCs 形态学观察倒置相差光学显微镜下观察发现，分离出的原代骨髓间充质干细胞在接后 24h-48h 后可贴壁生长（图 1-A），随着传代次数增加，到第三代时，细胞排规则，成规律性漩涡状紧密排列，形态多呈长纺锤形或长梭形。（图 1-B）
学位论文 纤维化模型鉴定观察大鼠肝脏病理切片结构，是否出现了提示肝脏肝纤维。结果显示肝细胞出现脂肪变性，伴有大量炎性细胞浸润见正常肝小叶结构，纤维组织增生，纤维隔形成，证明大成功。（图 3）
【参考文献】
相关期刊论文 前5条
1 Rosanna Dono;;Glypican 4 down-regulation in pluripotent stem cells as a potential strategy to improve differentiation and to impair tumorigenicity of cell transplants[J];Neural Regeneration Research;2015年10期
2 Silvia Berardis;Prenali Dwisthi Sattwika;Mustapha Najimi;Etienne Marc Sokal;;Use of mesenchymal stem cells to treat liver fibrosis:Current situation and future prospects[J];World Journal of Gastroenterology;2015年03期
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相关硕士学位论文 前2条
1 施静;胰岛联合骨髓间充质干细胞治疗糖尿病大鼠的研究[D];电子科技大学;2017年
2 周贤锋;骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠肝硬化的实验研究[D];川北医学院;2016年
本文编号：
2855687
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