自分泌运动因子—溶血磷脂酸轴调节溃疡性结肠炎中Th17细胞分化及复方苦参汤的干预作用

发布时间：2020-10-28 15:20

　　 【目的】溃疡性结肠炎是一种结直肠黏膜的非特异性慢性炎症性病变,迁延难愈,且发病趋势逐年升高,其发病机制目前尚不完全清楚。越来越多的研究表明,肠黏膜免疫调节紊乱是其发病的主要环节,其中Th17细胞发挥重要作用。Naive T细胞经过IL-6/STAT3通路在转录因子ROR-γt的作用下向Th17细胞分化,通过分泌主要效应细胞因子IL-17A诱导并维持慢性炎症反应。自分泌运动因子-溶血磷脂酸(ATX-LPA)轴参与了多种疾病慢性炎症过程,研究显示ATX在慢性炎症性肠病结肠组织中表达亦升高,然其作用及机制研究尚不完全明确。本实验研究目的在于探讨慢性溃疡性结肠炎小鼠模型中,ATX-LPA轴能否通过调节Th17细胞的分化产生致病效应,及复方苦参汤(Compound Sophorae decoction,CSD)能否通过干预ATX-LPA轴发挥治疗作用和治疗的最佳剂量,有助于阐明慢性溃疡性结肠炎的发病机制并提供新的治疗研究途径。【方法】60只SPF级Balb/c雄鼠随机分为6组:正常组、模型组、抑制剂组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,每组10只。适应性喂养一周后,除正常组外,其余各组给与2.5%DSS水溶液口服7天后正常饮水7天,循环3个周期。自造模开始,抑制剂组每隔一天给予硫双二氯酚1mg腹腔注射,模型组给与相同体积溶剂腹腔注射,至造模完成;中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组自第三周期开始每天给予0.4m L不同浓度中药水煎液灌胃。造模过程中每天观察小鼠精神状态、进食、活动度、大便性状及有无血便,记录小鼠体重。造模完成,处死小鼠,取脾脏、肠系膜淋巴结,流式细胞术检测Th17细胞占淋巴细胞比例;测量结肠长度,PBS轻轻冲洗干净后称重,部分组织置于4%多聚甲醛固定,用于HE染色观察结肠组织病理改变;其余组织立即置于-80℃保存用于其他检测。用Western blot检测结肠组织中ATX、MAd CAM-1蛋白的表达量,荧光定量PCR检测结肠组织中ATX、MAd CAM-1、LPAR、IL-6、STAT3、ROR-γt、IL-17A、IL-21 m RNA的含量。【结果】经DSS造模后,小鼠活动度差,出现稀便血便,体重明显下降,与正常组相比,模型组小鼠脾脏、肠系膜淋巴结中Th17细胞比例明显升高(P0.05),结肠组织中ATX、MAd CAM-1蛋白表达量和ATX、MAd CAM-1、LPAR、IL-6、STAT3、ROR-γt、IL-17A、IL-21m RNA的表达量也显著性增加(P0.05),而相较于抑制剂组,Th17细胞比例及上述指标表达量均下降,差异具有统计学意义(P0.05)。给予中药干预后,相较于模型组,中药低剂量、中剂量、高剂量组Th17细胞比例及上述指标表达量均呈下降趋势,其中中药中剂量组各指标下降趋势最大,相较于模型组差异有统计学意义(P0.05),而中药中剂量组相较于抑制剂组、中药低剂量组和中药高剂量组部分差异没有统计学意义。【结论】1.ATX-LPA轴可以参与DSS诱导的慢性溃疡性结肠炎的发病过程,加剧肠道炎症及肠黏膜损害;2.ATX-LPA轴可能通过促进Th17细胞分化参与慢性溃疡性结肠炎的发病过程;3.抑制ATX-LPA轴能减少Th17细胞分化而缓解肠道炎症,起到治疗作用,中药复方苦参汤也能通过抑制该轴发挥效应,且中剂量为最佳选择。
【学位单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R574.62
【部分图文】：

2.5%含 DSS 饮用水造模 3 周期后，除正常组外，其血便、食欲减退、体重下降、精神状态差、活动度下降炎症状。与模型组小鼠相比，抑制剂组自第 1 周期造模相对较小；中药各剂量组自第 3 周期开始，血便及体重中中药中剂量组效果明显优于中药低剂量组及中药高剂肠炎肠道粘膜长期处于炎症与修复反复发作状态，逐肠长度下降相对重量增加，因此结肠重量长度比升高。重量长度比相较于其他各组明显升高（*P＜0.05），中组明显下降（#P＜0.05），与中药低剂量组差异统计学

图 2. 小鼠结肠重量长度比慢性溃疡性结肠炎小鼠结肠组织病理学的影响组织中，肠黏膜上皮细胞完整，腺体排列整齐，内小鼠结肠壁明显增厚，腺体紊乱或消失，大量炎；抑制剂组及中药各剂量组可见肠壁增厚，腺体浸润，其中中药中剂量组腺体排列相对整齐，炎性A B

图 2. 小鼠结肠重量长度比3.2ATX-LPA 轴对慢性溃疡性结肠炎小鼠结肠组织病理学的影响正常小鼠结肠组织中，肠黏膜上皮细胞完整，腺体排列整齐，内含大量杯结构正常；模型组小鼠结肠壁明显增厚，腺体紊乱或消失，大量炎性细胞浸下层可见新生血管；抑制剂组及中药各剂量组可见肠壁增厚，腺体排列紊乱胞减少及炎性细胞浸润，其中中药中剂量组腺体排列相对整齐，炎性细胞数量3）。A B C
【参考文献】

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1 范恒;张丽娟;钟敏;刘星星;段雪云;左冬梅;唐庆;;复方苦参汤对溃疡性结肠炎DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路的干预作用[J];世界华人消化杂志;2013年08期

2 廖奕;范恒;陈小艳;张丽娟;;β-arrestin1在实验性大鼠结肠炎发生机制中的作用及氧化苦参碱的干预作用[J];中国中西医结合杂志;2010年10期

3 张声生;;溃疡性结肠炎中医诊疗共识意见[J];中华中医药杂志;2010年06期

4 范恒;段雪云;庄雄;吕建芳;寿折星;;乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织NF-κB p65的影响[J];世界华人消化杂志;2008年08期

本文编号：2860265