文献证实阻断乙肝病毒宫内传播的关键之一是降低母亲外周血中病毒含量。替比夫定是一种新型抗乙肝病毒(HBV)药物,尚未在妊娠妇女中进行研究,也没有替比夫定对HBV母婴传播影响的数据。 本研究应用可高水平表达HBV的转基因鼠,在妊娠期用替比夫定抗病毒治疗,检测母血中HBsAg、HBVDNA等感染指标,以及肝功能、病理等变化。同时观察其对母胎生长发育的影响,探讨药物降低母血HBV含量的作用和母胎安全性及毒副作用,以及对乙肝病毒母婴阻断的影响。 通过评价替比夫定对妊娠合并乙型肝炎病毒疗效与安全性的探索性实验研究,为HBsAg阳性孕妇妊娠期进行抗病毒治疗以阻断宫内传播提供动物实验依据。 第1部分替比夫定对乙肝病毒转基因鼠孕期安全性的实验研究 目的：探讨孕期服用抗病毒药物对母婴安全性的影响 材料与方法： 将稳定、高水平表达HBsAg抗原和HBV DNA阳性的33只HBV转基因母鼠随机分成A组、B组、C组。A组为HBVTg对照组,交配当天至分娩喂以生理盐水。B组即HBVTg试验组1,于交配前一天开始口服替比夫定100mg. kg／天,直至分娩。C组即HBVTg试验组2于交配前一天开始口服替比夫定200mg. kg／天,直至分娩。同时为了观察HBV转基因小鼠和普通小鼠在某些观察指标上是否存在差别,另选11只普通正常C57BL/6J (D组)作为对照组,于交配前一天开始口服替比夫定直至分娩。 各组孕鼠每天专人观察妊娠期的外观及活动等一般生理学和反应生育情况的指标；每组母鼠在妊娠18天时随机取3只,系统解剖,观察胎鼠。记录各组母鼠的主要脏器重量,对收集的母鼠主要脏器做病理学和免疫组织化学检查。 纪录每组新生鼠出生存活情况,T检验统计各组新生鼠存活只数,新生鼠出生后每5天称重一次,观察一般发育情况,记录张耳天数、出毛天数和开眼天数等指标。各组新生鼠生后28天采用系统解剖观察法做外观畸形、内脏畸形及骨骼畸形检查。对子鼠肝脏做病理学和免疫组化学检查。 结果： 各组母鼠给药后,外观、活动未见异常变化,未见母鼠出现死亡。母鼠体重随孕期增加均有正常增长,各组间体重增幅经比较,差异无显著性意义(P0.05)；各组间母鼠的饮水量、进食量比较,亦无明显差异(P0.05)。各组母鼠剖检均未见异常,未见与药物毒性相关的其它特征病变。各组新生鼠剖检未见异常畸形。 各组新生鼠存活只数无显著差异。新生鼠一般发育情况,各组比较均无显著性差异。 结论： 研究证明在观察替比夫定抗病毒作用及母婴阻断的同时,从多阶段、多方面,用多指标观察整个妊娠期尤其是妊娠早期,使用药物对母鼠、胎鼠及新生鼠安全性的影响,并观察了不同浓度替比夫定对母婴鼠的毒性影响作用,未发现对HBV转基因母鼠毒性反应,亦未见明显的迟发性毒性反应,对胎鼠无致畸作用,且不影响新生鼠的早期生长发育。 本研究应用了可高水平表达HBV的转基因孕鼠,更加全面的评价这种药物抗病毒对妊娠合并HBV携带状态的疗效与安全性,对乙型肝炎病毒携带孕鼠妊娠期,尤其是在妊娠早期是否选择抗病毒治疗做了初步的实验研究,为临床应用打下了一定的动物实验基础。 由于人的妊娠期长达40周,如果整个孕期使用替比夫定,对其子代的长期影响还需深入研究。 第2部分替比夫定对乙肝病毒转基因鼠母婴阻断性有效性的实验研究 目的：研究孕期服用抗病毒药物对乙肝病毒母婴阻断的有效性。 材料与方法： 将稳定、高水平表达HBsAg抗原和HBV DNA阳性的33只HBV转基因母鼠随机分成A组、B组、C组。A组为HBVTg对照组,交配当天至分娩喂以生理盐水。B组即HBVTg试验组1,于交配前一天开始口服替比夫定100mg. kg／天,直至分娩。C组即HBVTg试验组2于交配前一天开始口服替比夫定200mg. kg／天,直至分娩。 所有试验组和对照组统一用酶联免疫方法定量检测用药前后母鼠血清HBsAg,用荧光PCR定量分析HBV DNA浓度变化,以及与速率法检测肝功能变化的相关关系。 新生鼠生长至一月时,抽取血清用ELISA和PCR方法检测HBsAg和HBV DNA.另检查肝功能情况。 母鼠、新生鼠肝组织均行免疫组化检查。 结果： 33只HBVDNA阳性转基因鼠,在分别用生理盐水及替比夫定21天后,HBV DNA浓度下降均不明显,前后对比无差异(P0.05)。 转基因孕鼠HBsAg定量结果,连续服用生理盐水组,用药前后的血清HBsAg浓度变化不明显,连续服用替比夫定组用药后明显比用药前低(P0.05)。新生鼠血清中HBsAg和HBV DNA检测,结果替比夫定组新生鼠中HBsAg和HBV DNA阳性率经统计学检验比生理盐水组有明显差异。母鼠肝组织HBsAg颗粒呈强阳性表达。部分新生鼠肝组织无HBsAg颗粒表达,部分新生鼠肝组织HBsAg颗粒呈弱阳性表达。 结论： 本研究通过综合分析,认为孕期口服替比夫定可以显著降低乙型肝炎转基因小鼠体内HBsAg载量,并通过免疫组化证实,提高了母婴阻断率,且对母胎鼠均无影响。本研究中用替比夫定在转基因鼠孕期未观察到明显的抑制病毒复制作用,HBVDNA浓度无明显下降,主要是由于小鼠妊娠期短,以及转基因孕鼠的种类有关。因此,由于人的妊娠期长达40周,如果孕期使用替比夫定,会降低母体中病毒负荷,进一步提高母婴阻断率。 本研究应用了可高水平表达HBV的转基因孕鼠,更加全面的评价这种药物抗病毒对妊娠合并HBV携带状态的疗效与安全性,对乙型肝炎病毒携带孕鼠妊娠期,尤其是在妊娠早期是否选择抗病毒治疗做了初步的实验研究,为临床应用打下了一定的动物实验基础。但也正是由于应用HBV转基因小鼠,孕期应用抗病毒药物对HBV宫内传播的直接影响作用无法得到准确的观察,因此,还需要进一步的研究HBV转基因小鼠作为研究HBV宫内传播机制的动物模型的可行性。
【学位单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2009
【中图分类】：R512.62
【文章目录】：中文摘要
英文摘要
前言
第1部分 替比夫定对乙肝病毒转基因鼠孕期安全性的实验研究
1.1 材料与方法
1.2 结果
1.3 讨论
第2部分 替比夫定对乙肝病毒转基因鼠母婴阻断性有效性的实验研究
2.1 材料与方法
2.2 结果
2.3 讨论
结论
参考文献
综述
致谢
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本文编号：
2873444
