1、人宫颈癌基因（HCCR）促进胃癌发生相关机制的初步探讨 2、根除幽门螺杆菌对胃食管反流病相关症状的影响-Meta分析

发布时间：2020-11-10 06:43

　　 目的 观察HCCR2基因稳转永生化人胃粘膜上皮细胞GES-1后其细胞的生物学变化;研究在永生化人胃粘膜上皮细胞GES-1和人胃癌细胞SGC-7901中,表皮生长因子EGF经PI3K/Akt和MAPK信号转导通路诱导HCCR表达上调的分子机制。 方法 1、用脂质体法分别将HCCR2-pcDNA3.1及空载体质粒pcDNA3.1转染永生化人胃粘膜上皮细胞GES-1,G418筛选,克隆环挑取细胞克隆,Western blot技术筛选阳性克隆,并检测转染细胞中HCCR蛋白水平,流式细胞仪检测转染细胞的细胞周期,MTT法检测转染细胞的增殖能力。 2、永生化人胃粘膜上皮细胞GES-1和人胃癌细胞SGC-7901分别以不同浓度EGF(0、25、50、100ng/ml)培养24h;EGF(100ng/ml浓度)培养不同时间(0、8、16、24h);用EGFR抑制剂PD153035分别处理GES-1、SGC-7901细胞1h后,再加入诱导剂EGF(100ng/ml浓度)诱导24h,用Western blot法检测细胞中HCCR蛋白的表达变化。 3、用PI3K抑制剂LY294002分别处理GES-1、SGC-7901细胞1h后,再加入诱导剂EGF(100ng/ml浓度)诱导,用Western blot法检测细胞中HCCR蛋白的表达变化;用脂质体法分别将活性型Akt(CA-Akt-pcDNA3.1)、缺陷型Akt(DN-Akt-pcDNA3.1)及空载体质粒转染GES-1和SGC-7901细胞,G418筛选,克隆环挑取细胞克隆,Western blot技术筛选阳性克隆,并检测转染细胞中Akt和HCCR蛋白水平,流式细胞仪检测转染细胞的细胞周期,MTT法检测转染细胞的增殖能力。 4、用MEK1抑制剂PD98059分别处理GES-1、SGC-7901细胞1h后,再加入诱导剂EGF(100ng/ml浓度)诱导,用Western blot法检测细胞中HCCR蛋白的表达变化。 结果 1、HCCR的过表达促进永生化人胃粘膜上皮细胞GES-1的增殖 HCCR2基因转染细胞GES-1后,流式细胞法检测转染HCCR2组细胞细胞周期中S期较对照组(转染空载体质粒)延长,MTT法检测转染组细胞增值能力较对照组增强。 2、EGF诱导GES-1和SGC-7901中的HCCR的表达 GES-1细胞在无血清培养条件下,HCCR表达量很低,用EGF(50ng/ml)刺激24h后HCCR蛋白的表达升高,且随剂量的增加而增加,用EGF(100ng/ml)刺激24h后HCCR的表达量明显增加,提示EGF诱导GES-1细胞中HCCR的表达具有剂量和时间依赖性。用EGF刺激SGC-7901细胞后得到类似的结果。用EGFR抑制剂PD153035分别处理GES-1、SGC-7901细胞1h后,再加入诱导剂EGF诱导24h,HCCR的表达水平明显降低。 3、EGF经PI3K/Akt信号通路诱导HCCR的表达 用PI3K抑制剂LY294002分别处理GES-1、SGC-7901细胞1h后,再加入诱导剂EGF诱导24h,HCCR的表达水平明显降低;活性型Akt(CA-Akt-pcDNA3.1)基因转染GES-1细胞后,细胞中HCCR的表达上调,流式细胞法和MTT法检测转染组细胞增值能力较对照组增强。缺陷型Akt(DN-Akt-pcDNA3.1)基因转染SGC-7901细胞后,细胞中HCCR的表达下降,流式细胞法和MTT法检测转染组细胞增值能力较对照组减弱。 4、EGF经MAPK信号通路诱导HCCR的表达 用MEK1抑制剂PD98059分别处理GES-1、SGC-7901细胞1h后,再加入诱导剂EGF诱导24h,HCCR的表达水平明显降低。 结论 1、HCCR过表达能促进永生化人胃粘膜上皮细胞GES-1的增殖。 2、EGF能诱导永生化人胃粘膜上皮细胞GES-1和人胃癌细胞SGC-7901中HCCR表达增加,并具有时间、剂量依赖性。 3、EGF通过PI3K/Akt信号转导通路诱导HCCR的表达。 4、EGF通过MAPK信号转导通路诱导HCCR的表达。 目的 评价根除幽门螺杆菌(Hp)治疗对胃食管反流病相关症状的影响。 方法 在Pubmed,Embase数据库中检索2008年3月以前研究根除Hp与胃食管反流病关系的病例对照临床研究,对这些文献进行资料质量评价,并对符合的文献进行Meta-分析。 结果 1、14篇文献(包括4662例患者)符合入选标准。 2、Hp根除对GERD患者烧心症状的影响 (1)随访6个月:根除组成功根除Hp后烧心症状改善(OR=1.95,95%CI 1.11-3.44,P＜0.05);安慰剂组无明显变化(OR=1.51,95%CI0.83-2.75,P＞0.05)。 (2)随访1年:根除组成功根除Hp后烧心症状改善(OR=1.76,95%CI1.36-2.28,P＜0.0001);安慰剂组无明显变化(OR=1.32,95%CI0.89-1.95,P＞0.05)。 (3)随访2年:根除组成功根除Hp后烧心症状无明显变化(OR=1.64,95%CI 0.74-3.62,P＞0.05);安慰剂组改善(OR=2.10,95%CI1.77-2.69,P＜0.00001)。 3、Hp根除对GERD患者反酸症状的影响 (1)随访6个月:根除组成功根除Hp后反酸症状无明显变化(OR=22.66,95%CI 0.15-3340.99,P＞0.05);安慰剂组无明显变化(OR=19.97,95%CI 0.04-11156.34,P＞0.05)。 (2)随访1年:根除组成功根除Hp后反酸症状改善(OR=3.51,95%CI1.54-8.02,P＜0.0001);安慰剂组无明显变化(OR=2.23,95%CI0.82-6.07,P＞0.05)。 (3)随访2年:根除组成功根除Hp后反酸症状无明显变化(OR=1.94,95%CI0.61-6.22,P＞0.05);安慰剂组改善(OR=2.99,95%CI 2.39-3.74,P＜0.00001)。 4、Hp根除对GERD患者反流性食管炎的影响 (1)随访6个月:根除组成功根除Hp后反流性食管炎与根除前无明显变化(OR=0.09,95%CI 0.42-1.09,P＞0.05);安慰剂组无明显变化(OR=1.10,95%CI 0.51-2.37,P＞0.05)。 (2)随访1年:根除组成功根除Hp后反流性食管炎与根除前无明显变化(OR=1.2,95%CI0.33-4.39,P＞0.05);安慰剂组无明显变化(OR=1.30,95%CI0.59-3.20,P＞0.05)。 结论 1、成功根除Hp6个月、1年、2年后,在排除PPI的作用后,GERD患者烧心、反酸、反流性食管炎的发生率与根除之前比未发现有加重的情况。 2、GERD患者烧心症状在6个月和1年、反酸症状在1年成功根除Hp后症状有所改善。
【学位单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2008
【中图分类】：R735.2;R571
【部分图文】：

图ZB稳转HcCRZ一peDN八3.1的GES一1细胞的细胞周期图25TOtalS一Pha3e:5274铭Tot舀!BtAD:000笼nodebri3noC旧云，右.(FLZ二诀)

HCCR饭bu五n图1认 /estenblot鉴定稳转HCCRZ的GES一1细胞卜稳转空载体 peDNA3.1的GEs一1细胞;2:稳转HCCRZ一 PcDNA3.1的GES一1细胞八p0Ptos毛s F1Ieanalyzed:0109003 Deteanel夕zed:14一Jan一2008日 odel:1nno八_DSF八naly3一3t梦pe:曰anua皿anal夕。13 D1Ploid:100.00笼 D1PGl:46.18笼 at54.97 D1PGZ二 1727笼 at10760 D1PS:36.55笼 GZ/Gl:1.96笼 CV:17.40Tot舀!S一Ph日，e:3655笼Tota!BAD:0.00笼 nodebri3no﹄月住口N八PoPto，15:0.11笼州eon:1832Debri3:笼八ggre切ates:000笼日 odeledevent3:12082幽 1le夕 e!eevont， :12069Cye， eeventsPere卜。n能卜225RCS:1606图ZA稳转空载体pcDNA3.1的GES一1细胞的细胞周期图 F1leanel夕Zed:0310004 Dateonalyzed:12一Mar一2008曰 odel:1nno内_DSD八na角V3愁 3tyPe:州anua色analy3}3D一 Ploid:100.00呢 D1PGl:33.13铭 et49.860吞 PGZ:14.12笼 at99.73D云PS:52.74铭GZ/Gl:2.00笼 CV:13.32TOtalS一Pha3e:5274铭Tot舀!BtAD:000笼nodebri3no‘名盆住目C旧云，右.(FLZ二诀)八PoPto，13:0.53笼州ean:23.08Debrl，:笼八四req.tes:000%曰 odeledevent3:

BEGF诱导SGC一7901细胞中A火t和HCCR的表达
【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 柯杨;宁涛;高燕;李吉友;王明生;鄂征;;人胃粘膜上皮细胞原代培养及其生物学鉴定[J];解剖学报;1992年04期

2 王冰,苏秀兰,宁涛,冯莉雅,路桂荣,柯杨;MNNG诱导人胃粘膜上皮细胞系GES-1及正常胃粘膜标本原癌基因的激活[J];中华肿瘤杂志;1996年01期

本文编号：2877615