骨髓间充质干细胞移植治疗急性肝损伤的实验研究

发布时间：2020-11-10 07:17

　　 目的:本研究旨在阐明同种异体骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植对急性肝损伤大鼠肝功能和肝脏结构改善情况,并探讨干细胞是否通过Rho-ROCK信号通路影响肝脏修复过程中RhoA mRNA及其蛋白的表达变化,为进一步研究骨髓MSCs修复急性肝损伤的作用机制提供依据,并为临床治疗提供新的靶点。 方法:分离培养100g-120g健康幼龄雄性SD大鼠股骨MSCs并进行细胞周期检测及肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)诱导和糖原合成功能鉴定。将健康雌性180g-200g三月龄SD大鼠随机分为3组:正常对照(N)组(n=10)、CCL4(C)组(n=10)及CCL4+MSCs(T)组(n=10)。N组不予任何处理;T组和C组腹腔注射0.1ml/100g 60%四氯化碳(carbon tetrachloride,CCL4)花生油溶液制造急性肝损伤模型后24h,分别经鼠尾静脉移植MSCs和等量PBS。肝功能测定及病理组织学方法观察移植前后大鼠肝功能及肝脏结构改善情况。并行逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription- polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western blotting分别检测观察区间内RhoA mRNA和蛋白的表达变化。 结果: 1.大鼠骨髓MSCs 24h贴壁,原代7d可铺满90%以上的瓶底,传代后3d-5d可铺满瓶底,传至第4代仍保持高增殖性;流式细胞仪检测平均80%的MSCs处于G0/G1期,少量MSCs处于活跃的增殖期;经HGF诱导14d后MSCs具有糖原合成功能。 2.与C组相比,T组经移植MSCs后能显著改善CCL4急性损伤大鼠肝功能(1d时,ALT 89.70±3.09 vs 147.59±6.83,P0.05;AST 263.67±17.05vs 472.68±19.04,P0.01;7d时,ALT 42.38±14.31 vs 92.75±6.70,P0.05;AST 173.85±16.80 vs 260.41±25.35,P0.05),并迅速修复肝脏结构。 3.N组大鼠肝脏的RhoA mRNA和蛋白表达量极低,C组经CCL4损伤后,RhoA mRNA和蛋白的表达量迅速增加(1.39±0.046 vs 0.57±0.010,P0.01;1.23±0.020 vs 0.35±0.036,P0.01),此后表达量缓慢降低(7d时,0.76±0.019 vs 0.57±0.011,P0.01;0.87±0.042 vs 0.34±0.018,P0.01)。T组经MSCs移植后,与C组比较,RhoA mRNA和蛋白表达水平迅速下降(1d时,1.08±0.012 vs 1.39±0.046,P0.01;1.08±0.017 vs 1.23±0.020,P0.01。7d时,0.56±0.018 vs 0.76±0.019,P0.01;0.36±0.014 vs 0.87±0.042,P0.01)。 结论: 1.贴壁筛选法可以获得较纯化的MSCs,MSCs保持了较高的增殖潜能,并具有成体干细胞的特征,经HGF诱导后可分化为具有肝细胞功能的肝样细胞; 2.经鼠尾静脉移植MSCs后可以在一定程度上改善肝功能及修复受损的肝组织; 3.Rho-ROCK信号通路与急性肝损伤的发生发展有着密切的关系,MSCs能通过抑制RhoA的活性,达到改善和修复肝损伤的作用。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2009
【中图分类】：R575
【部分图文】：

SCs 的细胞周期 代 MSCs 中约有 80%处于 G0/G1期，G2期细胞约为 10.1.8%。图 1-2 中横坐标表示荧光信号的相对强度，以道为为 G0/G1期，G0是 G1的早期阶段，大约两倍道（102-22两者中间为 S 期；纵坐标表示细胞数。大部分细胞处于少数细胞处于增殖活跃期，符合成体干细胞特征。

特异性的 RhoA 基因条带，140 bp 处见造成大鼠肝损伤后 24 h，C 组 RhoA m±0.010）显著上调（P < 0.01），此后T 组 RhoA mRNA 在 1d、3d 和 7d 等（表 2-1，图 2-1），且 7d 时已恢复正表 2-1 大鼠肝脏组织 RTable2-1 Level of RhoA mRNA express1d 3d N 组 0.57±0.010 0.56±0.017 0.5C 组 1.39±0.046d1.06±0.024d0.7T 组 1.08±0.012bd0.93±0.020bd0.5bP<0.01vs C 组；dP<0.01vs N 组．M 1 2 3 4 5

白表达（1.23±0.020）较 N 组（0.35慢下降，至 14d 时才恢复正常水平。点较 C 组显著下降（P < 0.01）（表 2表 2-2 大鼠肝脏组织 RhTable2-2 Level of RhoA protein express1d 3d N 组 0.35±0.036 0.34±0.022 0.34±C 组 1.23±0.020d1.09±0.050d0.87T 组 1.08±0.017bd0.88±0.016bd0.36bP<0.01vs C 组；dP<0.01vs N 组．1 2 3 4 5
【参考文献】

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本文编号：2877647