LPS-TLR4通路在慢性酒精摄入大鼠肝纤维化发生的作用

发布时间：2020-11-16 22:54

　　 背景和目的：在全球范围内，酒精性肝病是导致疾病及死亡的一个重要原因。其病理类型主要包括脂肪肝、肝脏炎症及坏死、进展性肝纤维化，甚至发展为原发性肝细胞癌。虽然现在公认持续性饮酒可导致酒精性肝病，但并不是所有的酗酒者均进展为临床症状明显的肝损伤。其他因素，例如性别、遗传和环境因素在酒精性肝病发生中也起了重要作用。本项研究主要检测内毒素血症在慢性酒精摄入大鼠模型中触发肝脏纤维化的作用机制。 方法：将48只SD大鼠随机分为酒精1组、酒精2组、对照1组、对照2组共四组，同时喂养等热量的Lieber-Decarli配方的对照饲料和酒精饲料，1组喂养至8周，2组喂养至10周。采用光度法检测大鼠门静脉血浆LPS浓度。采用原位杂交方法检测大鼠肝脏组织中的TLR4mRNA和TGF-β1mRNA。针对大鼠肝脏组织连续切片，采用免疫组织化学染色检测FSP-1和Vimentin以确定HSC，检测F4/80确认Kupffer细胞。应用计算机图像分析系统检测FSP-1阳性HSC和TLR4mRNA阳性细胞的积分光密度值。采用Western blot检测大鼠肝脏组织中I型胶原蛋白和α-平滑肌动蛋白。采用RT-PCR法检测IL-1,IL-6, TNF-α and TGF-β1mRNA。采用HE染色和Masson三色染色法评估肝脏的组织学特点。 结果：Masson三色染色法显示，和正常组大鼠相比，酒精摄入10周末大鼠出现不同程度的中央静脉周围肝血窦周边纤维化，和Westernblot检测的Collagen I蛋白表达相一致。免疫组化染色显示在酒精摄入10周末大鼠肝脏组织有大量HSC和部分Kupffer细胞激活，而正常组肝脏仅有少量HSC表达。和10周末正常组大鼠相比，10周末酒精组大鼠门静脉血浆内毒素浓度明显增加，然而，8周末酒精组大鼠门静脉血浆内毒素水平未见升高，提示饮酒时间越长，对肠道通透性影响越大。原位杂交显示：酒精摄入10周末大鼠肝脏组织中大量肝细胞，部分HSC和少数Kupffer细胞表达TLR4mRNA，而10周末正常组大鼠或8周末酒精摄入大鼠仅见中央静脉周边内皮细胞或数个肝细胞表达TLR4mRNA。双变量相关分析结果显示：10周末酒精组肝脏TLR4mRNA表达强度与门静脉血浆LPS水平呈正相关(r=0.856; p0.05)。而且酒精喂养10周末大鼠肝脏的炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α及纤维源性因子TGF-β1基因转录水平较同期对照组增加。 结论：慢性酒精摄入可引起大鼠门静脉血浆LPS浓度明显升高，激活肝脏中HSC和Kupffer细胞上的TLR4信号通路，释放炎性因子和纤维源性因子TGF-β1，协同作用于HSC，使其活化，进一步介导肝脏纤维化。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2014
【中图分类】：R575.5
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第1章 引言
第2章 文献综述：LPS-TLR4 通路在慢性酒精摄入大鼠肝纤维化发生的作用
    2.1 ALD 的自然史、临床及病理特点与发病机理：
    2.2 肠源性的细菌成分在 ALD 发病机制中的作用
    2.3 TLR4 与其配体的结构特征、分布及功能
    2.4 LPS-TLR4 的信号传导通路
第3章 实验材料与方法
    3.1 实验材料
        3.1.1 基本资料
        3.1.2 试剂及液体配置
        3.1.3 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 HE 染色
        3.2.2 Masson 三色染色
        3.2.3 肝组织免疫组织化学检测方法
        3.2.4 大鼠肝组织原位杂交检测方法
        3.2.5 大鼠肝组织样品 Western blot 检测方法
        3.2.6 大鼠肝组织样品 RT-PCR 检测方法
        3.2.7 大鼠门静脉血浆内毒素 LPS 的检测方法
        3.2.8 免疫组化 FSP-1 阳性 HSC 与原位杂交 TLR4 mRNA 阳性细胞图像分析
    3.3 统计学方法
第4章 实验结果
    4.1 慢性酒精摄入大鼠肝脏病理学改变及纤维化特征
    4.2 慢性酒精摄入大鼠肝脏 HSC 和 Kupffer 细胞的激活
    4.3 酒精喂养大鼠门静脉血浆内毒素水平及其与肝脏 TLR4 信号通路关键因子的关系
        4.3.1 酒精喂养大鼠门静脉血浆 LPS 水平的变化
        4.3.2 TLR4 mRNA 在酒精摄入大鼠肝脏组织中表达及分布特点
        4.3.3 酒精喂养大鼠门静脉血浆内毒素水平与肝脏 TLR4 mRNA 表达强度的关系
        4.3.4 酒精喂养大鼠肝脏 TLR4 通路应答基因的表达
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
导师及作者简介
致谢

【参考文献】

相关期刊论文 前4条

1 厉有名;;酒精性肝病的流行病学特点[J];实用肝脏病杂志;2012年03期

2 ;Hyaluronic acid fragments evoke Kupffer cells via TLR4 signaling pathway[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2009年02期

3 黄艳;黄成;李俊;;肝纤维化病程中Kupffer细胞分泌的细胞因子对肝星状细胞活化增殖、凋亡的调控[J];中国药理学通报;2010年01期

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本文编号：2886763