骨髓间充质干细胞治疗小鼠自身免疫性肝炎的实验研究

发布时间：2017-04-07 19:00

  本文关键词：骨髓间充质干细胞治疗小鼠自身免疫性肝炎的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)的发病与诱发因素、自身抗原应答、遗传易感性和免疫调节网络等相关。单用糖皮质激素或联合免疫抑制剂存在疾病完全缓解率低,需要长期服药和类肾上腺皮质功能亢进综合症等多种副作用。AIH最终可进展为肝硬化并需要肝移植,寻找更安全、有效和经济的治疗方法将有深远的意义。对间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的理化特性和实际应用的研究为AIH的治疗提供了新的方向。MSCs具有免疫抑制、多向分化和抗纤维化等多方面的作用。本研究探讨MSCs对AIH小鼠模型的治疗作用及其可能的机制,并观察MSCs预移植对AIH小鼠成模的影响。 材料和方法： 1.AIH小鼠动物模型的建立。分次腹腔注射同种异体小鼠肝s-100抗原与弗氏完全佐剂乳化液,首次注射后第4周予以鉴定模型是否建立。 2.MSCs移植对AIH小鼠模型疗效观察。AIH小鼠随机分为三组：MSCs移植治疗组(组1),给予1×106/只MSCs单次尾静脉注射；地塞米松治疗组(组2),给予0.25mg/g·周DXM分次腹腔注射；空白对照组(组3),给予0.05ml/只·周PBS腹腔注射；实验第5周和第9周取肝脏制作病理切片,取血清测谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,ALT)水平 3.观察MSCs对AIH成模的影响。分为两组：首日MSCs移植,隔日给予造模处理(组Ⅰ)；首日给予磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS)注射,隔日造模处理(组Ⅱ)。首次注射后4周取肝脏做病理检查,取血清标本测ALT。 4.体外MSCs上清液对脾淋巴细胞增殖的影响：凝胶层析技术分离小鼠肝s-100抗原第1峰(s-100-1),用小鼠淋巴细胞分离液分离出正常小鼠的脾脏淋巴细胞,进行分组：刀豆蛋白A培养组(组A)；刀豆蛋白A联合MSCs上清液培养组(组B)；s-100-1培养组(组C)；s-100-1联合MSCs上清液培养组(组D)。对各组进行淋巴细胞增殖抑制实验,后测各组吸光度(optical density,OD)值。 结果： 1.AIH小鼠模型的建立：AIH小鼠肝脏平均炎症评分为2.67±0.516, Knodell评分5.50±1.975,血清学AIL水平为122.00+15.476。 2. MSCs移植于AIH小鼠的疗效观察： 2.1造模后(第4周)小鼠血清ALT为122.00±15.476U/L。第5周,组1、组2和组3小鼠血清ALT分别为：101.43±9.144U/L、115.00±10.315U/L和118.33±15.161U/L。三组间差异有统计学(P0.05),组1和组2两组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。第9周,组1、组2和组3小鼠血清ALT分别为：84.00±6.557U/L、98.83+15.767U/L和107.50±11.777U/L,三组间差异有统计学意义(P0.05),组1和组2两组间比较,差异有统计学意义(P0.05)。 2.2造模后(第4周)小鼠肝脏Knodell评分为5.50±1.975。第5周,组1、组2和组3小鼠肝脏Knodell评分分别为：3.00±1.528、3.33±1.366和4.67±1.862,三组间差异无统计学意义(P0.05),组1和组2差异无统计学意义(P0.05)。第9周,组1、组2和组3小鼠肝脏Knodell评分分别为：2.00±1.291、2.67±0.516和4.33±2.066,三组间差异有统计学意义(P0.05),组1和组2差异无统计学意义(P0.05)。 3. MSCs预移植对小鼠AIH模型成模的研究： 3.1组Ⅰ和组Ⅱ小鼠的ALT水平分别为：52.17±15.741U/L和122.±15.476U/L,差异有统计学意义(P0.05)。 3.2组Ⅰ和组Ⅱ小鼠的肝脏Knodell评分分别为：3.33±0.816和5.50±1.975,差异有统计学意义(P0.05)。 4.体外MSCs上清液对脾淋巴细胞增殖的影响：组A的OD值为0.267±0.167,组B的OD值为0.217±0.128,两组间差异有统计学意义(P0.05)。组C的OD值为0.165±0.187,组D的OD值为0.082±0.051,差异有统计学意义(P0.05)。 结论： 1.同种异体肝抗原与弗氏完全佐剂乳化液注射方法可以复制出AIH小鼠模型。 2. MSCs移植可以减低AIH小鼠血清ALT水平和肝脏炎细胞浸润,提示MSCs移植对AIH小鼠具有治疗作用。 3. MSCs预移植也可以显著降低AIH小鼠ALT水平和肝脏炎细胞浸润情况。提MSCs预移植可以预防AIH小鼠的发病。 4.体外MSCs上清液可以显著抑制抗原物质引起的T淋巴细胞增殖作用,这一作用可能是MSCs对AIH小鼠发挥治疗作用的机制。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 自身免疫性肝炎 动物模型 细胞移植 免疫抑制
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R575.1
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 符号说明10-11
• 前言11-14
• 研究现状、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 材料和方法14-23
• 结果23-31
• 讨论31-39
• 结论39
• 本研究创新性自我评价39-40
• 参考文献40-45
• 发表论文和参加科研情况说明45-46
• 附录：广州赛业公司MSCs质检报告46-51
• 综述51-63
• 综述参考文献56-63
• 致谢63

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本文编号：291084