致病性小肠结肠炎耶尔森菌生物血清型1B/O:8和2/O:9不同温度培养条件下相关抗原和蛋白质组学比较研究

发布时间：2020-12-13 11:17

　　小肠结肠炎耶尔森菌（Yersinia enterocolitica）是广泛存在于自然界的一种引起一系列肠道疾病的革兰氏染色阴性菌,是能在冷藏温度下生长的少数肠道致病菌之一。在许多国家已经证实由小肠结肠炎耶尔森菌引起的感染在人群中是比较常见的,属于全球性疾病。为了研究分离自不同地域的致病性小肠结肠炎耶尔森菌流行株在免疫原性和蛋白质组学中的差异,我们选择了一株分离自我国腹泻病人的致病性小肠结肠炎耶尔森菌（生物2型/血清O：9型）和日本的致病性菌株（生物1B/血清O：8型）进行了比较研究,旨在揭示因二者在免疫相关抗原成份以及蛋白质组学方面的不同之处而产生致病力强弱的原因。我们选取小肠结肠炎耶尔森菌的脂多糖、分泌蛋白（Yops）、膜蛋白以及菌体蛋白作为免疫相关抗原,首先以单向SDS-PAGE为基础,分析我国和国外分离株的差别。结果发现这两个不同的生物血清型菌株的脂多糖具有不同的免疫反应性；二者的Yops具有很大不同,这可以部分解释两个菌株产生致病力大小差异的原因。小肠结肠炎耶尔森菌的脂多糖和膜蛋白是引起宿主免疫反应最主要的免疫原成份,免疫印迹结果显示分子量为35kDa和10kDa的条带为主要免... 

【文章来源】：中国疾病预防控制中心北京市

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同温度培养条件下提取的脂多糖银染结果

分布于12KDa一78KDa之间。Ye92010的脂多糖呈现明显的带型分布特征(如图6.A第1泳道所示)，Ye8629和2006018的脂多糖没有明显的带型产生，表现为弥散性分布(图6.B第2泳道和图6.C第3泳道所示)。Ye92010与Ye8629和2006018菌株的脂多糖之间没有交叉反应，而Ye8629与2006018菌株LPS存在强烈的交叉反应，交叉反应区域约在23KDa一45KDa之间(如图6.B、C所示)。比较Ye92010和Ye8629分别在25oC和37oC培养后提取的脂多糖W已 Stemblot结果，发现同一菌株在两个温度下的杂交条带的分布和形状几乎一致。(如图6.A、D第1泳道，图6.B、E第2泳道所示)。

习疾病顶防控制中心硕1川14究生学位论的条件下分别诱导出Ye92010、Ye8629的上清蛋白。由电泳图可见，两个菌差异极其明显，其中Ye92O10诱导出的YoPs与文献上报到的结果一致l6]口’]，8629诱导出的YoPs却只能观察到三条带型，如图7.A所示。同时我们也分行了25℃缺ca2+环境下的诱导实验，结果不能诱导出YopS。我们对两个菌株编码YoPs的pYV质粒上的ya副和virF基因进行了PCR，发现两个菌株的yadA基因片段不在同一分子量位置，如图7.B第1和第道所示，测序比对结果显示少adA基因共测出752个碱基，两个菌株有14个不一致，Ye92O10在241一285位碱基和452一4%位碱基发生较大部分缺失，8所示。飞)irF基因共测出475个碱基，其中有5个碱基不一致，如图9所示。

【参考文献】：
期刊论文
[1]O∶9血清型小肠结肠炎耶尔森菌感染病理学特征研究[J]. 李振军,邱海燕,王鑫,景怀琦.  中国人兽共患病学报. 2008(05)
[2]假结核耶尔森菌研究进展[J]. 王鑫,景怀琦.  中国人兽共患病学报. 2007(10)
[3]鼠疫菌研究进展[J]. 张涛,徐冬蕾.  中国地方病防治杂志. 2006(05)
[4]小肠结肠炎耶尔森菌感染性疾病[J]. 景怀琦,徐建国.  疾病监测. 2005(09)



本文编号：2914464