PTEN过表达及突变对活化肝星状细胞FAK/p130Cas及paxillin信号转导的影响

发布时间：2020-12-15 20:26

　　目的探讨过表达的野生型第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因（phosphatase and tensin homology deleted on chromosome Ten,PTEN）及其突变体G129E基因（无脂质磷酸酶活性而只具有蛋白磷酸酶活性）对体外培养的活化肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSC）的黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）/p130 Crk相关底物蛋白（p130 Crk-associated substrate,p130Cas）及桩蛋白（paxillin）信号转导的影响。方法利用腺病毒反复感染AD293的方法扩增实验所需的腺病毒（Ad-GFP、AdPTEN、Ad-G129E）,分别测定三组病毒滴度;体外培养的活化大鼠HSC细胞系（HSC-T6株）,通过腺病毒作为载体将靶向双重磷酸酶活性的野生型PTEN基因及其只具有蛋白磷酸酶活性的突变体G129E基因瞬时转染至活化HSC;采用Western blot检测活化HSC的PTEN、FAK、磷酸化FAK（Thr397）[phosphorylated FAK（Th... 

【文章来源】：华北理工大学河北省

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

倒置相差显微镜下腺病毒感染AD293细胞72h出现完全病变效应

当基因研究及治疗要求载体感染效率＞80%，在倒置荧光显微镜计数显示当M.O.I. 100 时 Ad-GFP、Ad-PTEN 和 Ad-G129E 感染 HSC 的感染效率达到要求，因此，将选取 M.O.I.为 100 进行后续试验（见 Fig.4）。注：A: 腺病毒感染 HSC 12h 的荧光表达；B: 腺病毒感染 HSC 24h 的荧光表达；C: 腺病毒感染 HSC 48h 的荧光表达。图.3 倒置荧光显微镜下腺病毒（M.O.I. 100）感染 HSC 12、24、48h 的荧光表达Fig.3 Expressions of GFP at 12, 24 and 48 hours after adenovirus infection in HSC at M.O.I. 100

ΔCt ΔΔC tRelative expression fold of FAKmRNA compared to control 2.811±0.047 0 1 2.843±0.029 0.032 0.977 2.828±0.049 0.017 0.988 组 2.820±0.053 0.009 0.994 Western blot 技术检测腺病毒感染 HSC 48h 时各组TEN 组（0.824±0.024）、Ad-G129E 组（0.801±0.028）及 Ad-GFP（0.819±0.020），显然各组之间 HS异，P＞0.05（见 Fig.6）。Control Ad-GFP Ad-PTEN Ad-G129EF


本文编号：2918857