骨髓间充质干细胞外泌体对小鼠肝纤维化的作用研究
发布时间：2020-12-21 09:55
目的:肝纤维化(Hepatic fibrosis,HF)是一个病理生理过程,肝脏的炎症反应和中毒损伤等可造成此种损害,严重影响了人们的身体健康和生活质量。HF患者无特异性的临床表现,诊断需要综合评估全身情况。HF的肝脏组织表面发生了明显的改变,纤维化时的胶原沉积对肝脏血流和肝细胞灌注有明显的影响。HF发生发展过程复杂,一般来说纤维化多为不可逆,若病变持续进展,最终形成肝硬化。目前,纤维化的临床诊疗尚无特效药,而药物的不规范使用可加重肝脏负担。研究发现骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)来源的外泌体对HF等肝脏疾病具有一定的治疗作用,具有无排斥反应和安全性高等优点。本实验通过培养BMSCs获得其外泌体,以胆总管结扎(Bile duct ligation,BDL)方法诱导小鼠HF。最后,对其移植BMSCs来源外泌体,采取多种方式对HF的作用进行研究,分析实验数据,以期为外泌体的深入研究提供实验基础。方法:采用全骨髓贴壁法分离培养BMSCs,用流式细胞技术对其进行鉴定;按照试剂说明书步骤提取BMSCs来源外泌体,采用透射电镜、粒...
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
第3代BMSCs倒置显微镜显微镜形态（100x）
图 2 BMSCs 流式细胞图4 讨论BMSCs 源于中胚层，是一种具有强大的多向分化潜能和自我更新的多能干细胞，具有来源广泛、取材方便、和可自体移植等特点[40]。BMSCs 是干细胞领域的研究热点。近年来，BMSCs 相关研究取得了一系列的进展，在组织工程、损伤修复、肿瘤治疗和基因治疗等[41]方面有着广阔的应用前景。目前，BMSCs 的分离培养、纯化和扩增的方法较多，为其在基础医学和临床应用的深入研究和应用提供了坚实的实验基础。常用的 BMSCs 分离与培养方法有: (1)密度梯度离心法[42]:依据 BMSCs 与其他细胞的密度、直径和在溶液中的沉降速度不同进行分离。该方法操作相对简单，对骨髓需求量少，分离培养效果佳，可有效分选出纯度较高的细胞。但该法易造成细胞流失和生长微环境发生变化，并且相应的分离液对于干细胞的生长影响未见具体的研究。(2)免疫磁珠分选法：根据 BMSCs 表面抗原能够和连接在磁珠上的特异性单抗结合的特征将
图 3 蛋白浓度测定标准曲线2.2.4.2 外泌体蛋白的 SDS-PAGE 凝胶电泳（1）配胶：提前用水检查配胶玻璃板是否漏水，按说明配好分离胶（5ml，用滤纸吸净架子里的水，用 1000ul 的枪头加入分离胶，以刚超过绿色标准，上层用 1000ul 的枪头加满三蒸水压胶，放置 30min 后，待水和胶之间显分界线后配好浓缩胶（2ml/块）。用滤纸吸净上层三蒸水，用 1000ul 的加入浓缩胶，平行插入梳子，约 30min 后，将配好的胶放入-4℃冰箱保存过继续进行后续实验。（2）电泳：配置的胶凝固后，在水中拔去梳子，动作要轻柔谨慎。将配胶璃板放入电泳槽中，加入电泳液开始上样，内槽加满电泳液，外槽加电泳液gel 标志处；上样后即可开始电泳，连接电泳仪，黑对黑，红对红，调整参：恒压，S1=80V（30min），S2=120V（60min）。电泳开始后，检查-80℃是否有足够的冰，以备转膜用，同时打开制冰机。（3）转膜：每块胶准备 2 大 2 小 4 张滤纸，2 块海绵，1 张 PVDF 膜（提前
【参考文献】：
期刊论文
[1]非侵入性诊断肝纤维化模型研究进展[J]. 甘龙禹,李治国,郝文成,姚慧,蒋坤松. 肝脏. 2018(01)
[2]无创肝纤维化诊断研究进展[J]. 王晶晶,陈国凤. 肝脏. 2018(01)
[3]肝纤维化中西医结合诊疗共识意见(2017年)[J]. 李军祥,陈誩,姚树坤. 中国中西医结合消化杂志. 2017(12)
[4]Non-invasive diagnosis of liver fibrosis and cirrhosis[J]. Yoav Lurie,Muriel Webb,Ruth Cytter-Kuint,Shimon Shteingart,Gerardo Z Lederkremer. World Journal of Gastroenterology. 2015(41)
[5]Reversibility and heritability of liver fibrosis:Implications for research and therapy[J]. Hussein M Atta. World Journal of Gastroenterology. 2015(17)
[6]Non-invasive diagnosis of advanced fibrosis and cirrhosis[J]. Suraj Sharma,Korosh Khalili,Geoffrey Christopher Nguyen. World Journal of Gastroenterology. 2014(45)
[7]Study of liver cirrhosis over ten consecutive years in Southern China[J]. Xing Wang,Shang-Xiong Lin,Jin Tao,Xiu-Qing Wei,Yuan-Ting Liu,Yu-Ming Chen,Bin Wu. World Journal of Gastroenterology. 2014(37)
[8]Nanotechnology applications for the therapy of liver fibrosis[J]. Lydia Giannitrapani,Maurizio Soresi,Maria Luisa Bondì,Giuseppe Montalto,Melchiorre Cervello. World Journal of Gastroenterology. 2014(23)
[9]Advances in mesenchymal stem cells combined with traditional Chinese medicine therapy for liver fibrosis[J]. Shu Dong,Shi-bing Su. Journal of Integrative Medicine. 2014(03)
[10]Hepatic inflammation and progressive liver fibrosis in chronic liver disease[J]. Albert J Czaja. World Journal of Gastroenterology. 2014(10)
本文编号：2929632
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
第3代BMSCs倒置显微镜显微镜形态（100x）
图 2 BMSCs 流式细胞图4 讨论BMSCs 源于中胚层，是一种具有强大的多向分化潜能和自我更新的多能干细胞，具有来源广泛、取材方便、和可自体移植等特点[40]。BMSCs 是干细胞领域的研究热点。近年来，BMSCs 相关研究取得了一系列的进展，在组织工程、损伤修复、肿瘤治疗和基因治疗等[41]方面有着广阔的应用前景。目前，BMSCs 的分离培养、纯化和扩增的方法较多，为其在基础医学和临床应用的深入研究和应用提供了坚实的实验基础。常用的 BMSCs 分离与培养方法有: (1)密度梯度离心法[42]:依据 BMSCs 与其他细胞的密度、直径和在溶液中的沉降速度不同进行分离。该方法操作相对简单，对骨髓需求量少，分离培养效果佳，可有效分选出纯度较高的细胞。但该法易造成细胞流失和生长微环境发生变化，并且相应的分离液对于干细胞的生长影响未见具体的研究。(2)免疫磁珠分选法：根据 BMSCs 表面抗原能够和连接在磁珠上的特异性单抗结合的特征将
图 3 蛋白浓度测定标准曲线2.2.4.2 外泌体蛋白的 SDS-PAGE 凝胶电泳（1）配胶：提前用水检查配胶玻璃板是否漏水，按说明配好分离胶（5ml，用滤纸吸净架子里的水，用 1000ul 的枪头加入分离胶，以刚超过绿色标准，上层用 1000ul 的枪头加满三蒸水压胶，放置 30min 后，待水和胶之间显分界线后配好浓缩胶（2ml/块）。用滤纸吸净上层三蒸水，用 1000ul 的加入浓缩胶，平行插入梳子，约 30min 后，将配好的胶放入-4℃冰箱保存过继续进行后续实验。（2）电泳：配置的胶凝固后，在水中拔去梳子，动作要轻柔谨慎。将配胶璃板放入电泳槽中，加入电泳液开始上样，内槽加满电泳液，外槽加电泳液gel 标志处；上样后即可开始电泳，连接电泳仪，黑对黑，红对红，调整参：恒压，S1=80V（30min），S2=120V（60min）。电泳开始后，检查-80℃是否有足够的冰，以备转膜用，同时打开制冰机。（3）转膜：每块胶准备 2 大 2 小 4 张滤纸，2 块海绵，1 张 PVDF 膜（提前
【参考文献】：
期刊论文
[1]非侵入性诊断肝纤维化模型研究进展[J]. 甘龙禹,李治国,郝文成,姚慧,蒋坤松. 肝脏. 2018(01)
[2]无创肝纤维化诊断研究进展[J]. 王晶晶,陈国凤. 肝脏. 2018(01)
[3]肝纤维化中西医结合诊疗共识意见(2017年)[J]. 李军祥,陈誩,姚树坤. 中国中西医结合消化杂志. 2017(12)
[4]Non-invasive diagnosis of liver fibrosis and cirrhosis[J]. Yoav Lurie,Muriel Webb,Ruth Cytter-Kuint,Shimon Shteingart,Gerardo Z Lederkremer. World Journal of Gastroenterology. 2015(41)
[5]Reversibility and heritability of liver fibrosis:Implications for research and therapy[J]. Hussein M Atta. World Journal of Gastroenterology. 2015(17)
[6]Non-invasive diagnosis of advanced fibrosis and cirrhosis[J]. Suraj Sharma,Korosh Khalili,Geoffrey Christopher Nguyen. World Journal of Gastroenterology. 2014(45)
[7]Study of liver cirrhosis over ten consecutive years in Southern China[J]. Xing Wang,Shang-Xiong Lin,Jin Tao,Xiu-Qing Wei,Yuan-Ting Liu,Yu-Ming Chen,Bin Wu. World Journal of Gastroenterology. 2014(37)
[8]Nanotechnology applications for the therapy of liver fibrosis[J]. Lydia Giannitrapani,Maurizio Soresi,Maria Luisa Bondì,Giuseppe Montalto,Melchiorre Cervello. World Journal of Gastroenterology. 2014(23)
[9]Advances in mesenchymal stem cells combined with traditional Chinese medicine therapy for liver fibrosis[J]. Shu Dong,Shi-bing Su. Journal of Integrative Medicine. 2014(03)
[10]Hepatic inflammation and progressive liver fibrosis in chronic liver disease[J]. Albert J Czaja. World Journal of Gastroenterology. 2014(10)
本文编号：2929632
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xiaohjib/2929632.html
最近更新
教材专著
