AFP抑制天然免疫的Siglec-5途径

发布时间：2017-04-11 10:17

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【摘要】：慢性肝病是影响人类健康重要的疾病之一。由于肥胖的全球趋势、增加的酒精消费和肝炎病毒的感染等因素,肝脏疾病的发病率预计会大幅上升。慢性肝病的发展结局多数会进展为肝硬化,肝硬化患者的免疫功能低下及其易感染体质造成50%的住院率、15-35%进一步发展成院内感染,并导致较高的死亡率。在天然免疫系统中,肝硬化患者外周血中性粒细胞和单核细胞的功能障碍可能与细菌性感染相关,但影响免疫功能的机制仍然不是十分清楚。本论文探讨了甲胎蛋白(a-fetoprotein, AFP)在天然免疫功能及在慢性肝病细菌感染之间的关系。AFP是胎儿主要的血清球蛋白,其合成部位主要在卵黄囊和肝脏,并运输到其他各种组织和细胞中。研究表明AFP影响着免疫功能的各个方面：可以抑制天然杀伤细胞活性、抑制T细胞的增殖及T细胞诱导的有丝分裂反应、降低巨噬细胞吞噬功能等。文献报道,在怀孕期间一些自身免疫疾病将得到缓解,如类风湿性关节炎、多发性硬化症和其它自身免疫疾病,这些缓解在孕晚期最明显,正好与孕产妇血清AFP水平增加相一致。但是,AFP与天然免疫的联系机制仍不清楚。天然免疫(Innate Immunity)也称固有免疫或非特异性免疫,通过遗传获得。天然免疫和特异性免疫一样,是生物体在长期种系发育和进化过程中逐渐形成的一系列防御机制。天然免疫系统是由免疫器官、免疫细胞和免疫分子构成的,主要包括组织屏障(皮肤黏膜、血脑屏障等)、天然免疫细胞(树突状细胞、巨噬细胞等)及天然免疫分子(干扰素、趋化因子等)。影响天然免疫的因素有防御素、补体、溶菌酶、炎性介质、唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素(sialic acid binding immunoglobulin-like lectins,Siglecs)等,其中,Siglecs介导细胞信号转导、主要起调节天然免疫的功能。Siglecs被认为是重要的调节细胞活化和炎症反应的细胞膜受体。Siglec-5是一种免疫调节因子,也是一个隶属于免疫球蛋白超家族的凝集素家族,其成员可通过特异性识别并结合糖蛋白和糖脂的糖基侧链上的唾液酸来介导免疫调节信号的传导。病原微生物通过膜表面唾液酸结构特异性结合免疫细胞表面的Siglecs从而诱导宿主的免疫应答作用。AFP除了作为配基与细胞膜上的AFP受体结合并调控细胞生长外,细胞内的AFP还可以通过和转录因子或一些关键蛋白之间发生相互作用参与基因的转录调控。AFP是一种糖蛋白,其多糖结构上的唾液酸可能会与Siglec-5的膜外结构结合并激发免疫抑制作用。本课题在U937细胞中研究AFP通过Siglec-5抑制天然免疫的途径。研究方法：(1).研究AFP与U937细胞及人外周血中性白细胞的结合：分离人外周血中性白细胞和培养的U937细胞,采用放射受体分析法测定125I-AFP与U937细胞及人外周血中性白细胞的结合作用。(2).研究AFP对白细胞吞噬甲型链球菌作用的影响：首先制备好甲型链球菌,然后用AFP处理白细胞,采用细菌吞噬法测定AFP对白细胞吞噬甲型链球菌作用的影响。(3).研究AFP对全血氧爆发能力的影响：AFP处理细胞后在fMLP (N-formylmethionyl-leucyl-henyl-alanine,N-甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸)刺激因子作用下采用鲁米诺荧光分析法测定AFP对全血氧爆发能力的影响。(4).研究AFP对Siglec-5表达的影响：AFP处理U937细胞后采用流式细胞法测定Siglec-5表达的变化。(5).研究AFP激活Siglec-5及细胞内SHP-1/SHP-2的活化及招募作用：AFP孵育U937细胞后再用B型链球菌处理,采用免疫共沉淀法用Siglec-5抗体研究AFP激活Siglec-5后细胞内SHP-1/SHP-2的活化。研究结果：(1).125I-AFP放射受体分析方法证明AFP与U937细胞及外周血中性白细胞的结合。(2).细菌吞噬法证明AFP抑制白细胞吞噬甲型链球菌的作用。(3).“呼吸爆发”检测方法证明AFP对全血的氧爆发能力有短暂增强作用。(4).流式细胞法表明在U937细胞中AFP促进了Siglec-5的表达。(5).免疫共沉淀法证明AFP具有激活Siglec-5并促进募集细胞内SHP-1/SHP-2的作用。结论：AFP通过激活U937细胞Siglec-5的信号转导,抑制白细胞对甲型链球菌的吞噬和杀伤功能。肝癌及慢性肝病高水平血清AFP可能导致免疫功能的下降及感染。
【关键词】：甲胎蛋白(AFP) 肝硬化 天然免疫 Siglec-5 自身免疫疾病
【学位授予单位】：陕西师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575;R735.7
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 缩略词表10-11
• 第1章 引言11-29
• 1.1 甲胎蛋白(AFP)的分子生物学11-17
• 1.1.1 AFP基因11
• 1.1.2 AFP蛋白的分子结构11-14
• 1.1.3 AFP的受体14-15
• 1.1.4 AFP的生物学功能15-17
• 1.2 天然免疫17-26
• 1.2.1 天然免疫的概念17
• 1.2.2 唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素(Siglecs)17-25
• 1.2.3 Siglec-525-26
• 1.3 AFP与免疫及感染性疾病26-27
• 1.4 本论文的研究意义27-29
• 第2章 AFP对天然免疫的抑制作用研究29-41
• 2.1 材料和试剂29-31
• 2.1.1 细胞29
• 2.1.2 主要试剂29
• 2.1.3 主要仪器设备29-30
• 2.1.4 主要的溶液和试剂配制30-31
• 2.2 实验方法31-34
• 2.2.1 实验流程31
• 2.2.2 AFP与U937细胞及人外周血中性白细胞的结合31-33
• 2.2.3 AFP对白细胞吞噬甲型链球菌作用的影响33-34
• 2.3 实验结果及分析34-38
• 2.3.1 AFP与U937及人外周血中性白细胞的结合34-35
• 2.3.2 AFP对白细胞吞噬甲型链球菌的抑制作用35-36
• 2.3.3 AFP对全血氧爆发能力的抑制36-37
• 2.3.4 小结37-38
• 2.4 讨论38-41
• 第3章 AFP抑制天然免疫Siglec-5途径41-51
• 3.1 材料和试剂41-43
• 3.1.1 细胞41
• 3.1.2 主要试剂41
• 3.1.3 主要仪器设备41
• 3.1.4 主要的溶液和试剂配制41-43
• 3.2 实验方法43-46
• 3.2.1 流式细胞法研究AFP对Siglec-5表达的影响43-44
• 3.2.2 免疫沉淀法研究AFP激活Siglec-5及细胞内SHP-1/SHP-2的活化及招募作用44-46
• 3.3 实验结果及分析46-49
• 3.3.1 AFP诱导Siglec-5的表达46-47
• 3.3.2 AFP激活Siglec-5及募集细胞内SHP-1/SHP-247-49
• 3.3.3 小结49
• 3.4 讨论49-51
• 第4章 总结51-53
• 参考文献53-61
• 致谢61-63
• 攻读硕士学位期间的研究成果63

【参考文献】

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1 刘往;;甲胎蛋白研究进展[J];当代医学;2012年01期

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本文编号：298879