川芎嗪和大鼠CTGF miRNA质粒对高糖刺激大鼠肝星状细胞CTGF、TGF-β表达的影响

发布时间：2017-04-12 17:21

  本文关键词：川芎嗪和大鼠CTGF miRNA质粒对高糖刺激大鼠肝星状细胞CTGF、TGF-β表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨川芎嗪和大鼠CTGF miRNA质粒对高糖刺激大鼠肝星状细胞（HSC）的结缔组织生长因子（CTGF）、转化生长因子(TGF-β)及Ⅰ型胶原表达的作用效果，为在临床上应用川芎嗪治疗及预防肝纤维化提供理论依据。 方法：根据大鼠CTGF mRNA序列设计合成3种大鼠CTGF miRNA质粒及1种阴性质粒，分别转染HSC，转染后于荧光显微镜下观察质粒瞬时转染肝星状细胞的转染率，应用RT-PCR法检测四种质粒转染的细胞CTGF mRNA的表达水平，筛选出干扰效率最高的一种大鼠CTGFmiRNA质粒；将干扰效率最高的大鼠CTGF miRNA质粒及阴性对照质粒分别转染HSC，，经杀稻瘟菌素持续压力筛选获得稳定表达大鼠CTGF miRNA质粒的大鼠肝星状细胞、稳定表达阴性质粒的大鼠肝星状细胞。培养HSC、稳定表达大鼠CTGF miRNA质粒的大鼠肝星状细胞、稳定表达阴性质粒的大鼠肝星状细胞，高糖及川芎嗪作用后提取细胞总RNA、总蛋白检测各组CTGF、TGF-β mRNA表达量及蛋白的表达量。高糖及川芎嗪作用后收集细胞培养上清液检测各组Ⅰ型胶原表达量。结果： 应用RT-PCR法筛选出干扰效率最高的大鼠CTGF miRNA质粒。获得稳定表达大鼠CTGF miRNA质粒的大鼠肝星状细胞及稳定表达阴性质粒的大鼠肝星状细胞。高糖组CTGF mRNA表达量及CTGF蛋白表达量较空白对照组显著增加（P0.01）；高糖组TGF-beta mRNA表达量及TGF-beta蛋白表达量较空白对照组显著增加（P0.01）；高糖组Ⅰ型胶原表达量较空白对照组显著增加（P0.01）。与高糖组比较，川芎嗪组能明显下调CTGF mRNA表达量及CTGF蛋白表达量（P0.01）；川芎嗪组能明显下调TGF-beta mRNA表达量及TGF-beta蛋白表达量（P0.01）；川芎嗪组能明显下调Ⅰ型胶原的表达量（P0.01）；大鼠CTGF miRNA质粒干扰组能显著下调CTGF mRNA表达量及CTGF蛋白表达量（P0.01）；大鼠CTGF miRNA质粒干扰组能显著下调TGF-beta mRNA表达量及TGF-beta蛋白表达量（P0.01）；大鼠CTGFmiRNA质粒干扰组能显著下调Ⅰ型胶原的表达量（P0.01）。川芎嗪组与大鼠CTGF miRNA质粒干扰组相比，CTGF mRNA及蛋白的表达量差异无统计学差异（P0.05）；川芎嗪组Ⅰ型胶原的表达量较大鼠CTGFmiRNA质粒干扰组低，且差别有统计学意义（P0.01）。 结论：由此得出高糖可刺激CTGF、TGF-beta、Ⅰ型胶原表达量，而川芎嗪、大鼠CTGF miRNA质粒可下调CTGF、TGF-beta、Ⅰ型胶原的表达。川芎嗪在治疗肝纤维化中的作用明显，有较强的临床实用价值。
【关键词】：川芎嗪 大鼠肝星状细胞 结缔组织生长因子 转化生长因子-β RNA干扰
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R575.2
【目录】：

• 符号说明5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11
• 材料11-14
• 方法14-26
• 结果26-34
• 讨论34-36
• 问题与展望36-37
• 全文小结37-38
• 参考文献38-39
• 附图39-42
• 文献综述42-51
• 参考文献48-51
• 致谢51-52
• 攻读硕士学位期间发表的论文目录52-53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

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4 谭力学,李孝生,刘增权,刘梁英;川芎嗪和大黄酸联用对大鼠肝纤维化的抑制作用[J];中华肝脏病杂志;2004年11期

  本文关键词：川芎嗪和大鼠CTGF miRNA质粒对高糖刺激大鼠肝星状细胞CTGF、TGF-β表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：301794