NOX4/ROS与RhoA/ROCK1信号通路对HSC-T6细胞行为学的影响及熊果酸的干预靶点

发布时间：2021-02-14 15:59

　　背景:研究发现NOX4和Rho A都在纤维化中起重要作用且两者相互调节:在肺纤维化中,NOX4/ROS为Rho A/ROCK1信号通路的上游分子;在肾纤维化中,两者恰好相反。目前未见两者在肝纤维化中是否存在上述类似或其他调节机制的报道。我们前期研究发现熊果酸（UA）能通过下调肝星状细胞（HSC）中NOX4/ROS的表达,抑制Rho GTP酶家族成员中Rac1的表达,逆转肝纤维化。但UA对Rho GTP酶家族另一重要成员Rho A的作用未见报道。据此我们设想,Rho A/ROCK1有可能是除NOX4/ROS之外另一条在肝纤维化发生发展过程中起重要作用的信号通路,并且它们两条信号通路之间可能存在相互调节作用;UA可能通过抑制HSC中Rho A/ROCK1信号通路的激活,进而抑制NOX4/ROS与Rho A/ROCK1的相互作用而影响HSC的生物学行为,从而达到逆转肝纤维化的目的。目的:探究NOX4/ROS和Rho A/ROCK1信号通路对HSC-T6细胞行为学的影响及它们之间的相互作用机制;观察UA对两条信号通路的影响,以阐明UA减轻肝纤维化过程中对HSC-T6细胞增殖、迁移、活化的可能机... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 实验细胞
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
    2.2 研究方法
        2.2.1 主要液体配制
        2.2.2 HSC-T6细胞的培养
        2.2.3 HSC-T6细胞慢病毒转染实验及稳定株筛选
        2.2.4 HSC-T6细胞的加药处理
        2.2.5 细胞总蛋白的提取
        2.2.6 细胞总RNA的提取及cDNA合成
        2.2.7 荧光定量PCR
        2.2.8 Western blotting检测细胞内蛋白表达
        2.2.9 F-actin免疫荧光染色
        2.2.10 细胞内ROS测定
        2.2.11 MTS法检测细胞活力
        2.2.12 TUNEL法检测HSC-T6细胞凋亡
        2.2.13 细胞划痕实验
        2.2.14 Transwell侵袭实验
        2.2.15 免疫共沉淀法（Co IP）检测细胞内蛋白相互结合
        2.2.16 Biacore法检测体外纯蛋白间相互作用
    2.3 结果分析与统计学处理
第3章 实验结果
    3.1 基于慢病毒转染技术的稳定细胞株构建及鉴定
        3.1.1 NOX4干扰（NOX4i）慢病毒转染及鉴定
        3.1.2 RhoA干扰（RhoAi）慢病毒转染及鉴定
        3.1.3 NOX4过表达（NOX4OE）慢病毒转染及鉴定
    3.2 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞增殖、凋亡的影响
        3.2.1 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞增殖的影响
        3.2.2 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞凋亡的影响
    3.3 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞迁移、侵袭的影响
        3.3.1 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞迁移的影响
        3.3.2 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞侵袭实验的影响
    3.4 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞内ROS水平的影响
    3.5 NOX4与RhoA对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞细胞骨架F-actin的影响
    3.6 UA干预对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞NOX4/ROS及RhoA/ROCK1信号通路相关基因m RNA表达的影响
    3.7 UA干预对TGF-β1 导致的HSC-T6细胞NOX4/ROS及RhoA/ROCK1信号通路相关蛋白表达的影响
    3.8 NOX4与Rho A蛋白间相互作用
        3.8.1 NOX4OE稳定细胞株内NOX4及Rho A免疫共沉淀（Co IP）
        3.8.2 体外全长NOX4与Rho A纯蛋白Biacore蛋白互作分析
第4章 讨论
    4.1 NOX4/ROS信号通路对HSC行为学及相关蛋白表达的影响
    4.2 RhoA/ROCK1信号通路对HSC行为学影响及相关蛋白表达的影响
    4.3 NOX4/ROS与RhoA/ROCK1信号通路相互调控的作用机制
    4.4 熊果酸（UA）抗纤维化机制及相关分子靶点
    4.5 实验存在的问题与不足
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间研究成果
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]潜在肝毒性中药的成分研究进展[J]. 吴豪,钟荣玲,夏智,黄厚才,仲青香,封亮,宋捷,贾晓斌.  中国中药杂志. 2016(17)
[2]Liver fibrosis markers of nonalcoholic steatohepatitis[J]. Hirayuki Enomoto,Yukihiro Bando,Hideji Nakamura,Shuhei Nishiguchi,Masafumi Koga.  World Journal of Gastroenterology. 2015(24)
[3]熊果酸对肝星状细胞内活性氧产生的影响及与细胞凋亡的关系[J]. 李博,李弼民,何文华,刘志坚,张焜和,陈江,刘戈云,张新华,朱萱.  广东医学. 2011(11)



本文编号：3033513