布拉氏酵母菌对炎症性肠病小鼠的肠黏膜免疫调节作用的研究

发布时间：2017-04-16 16:04

  本文关键词：布拉氏酵母菌对炎症性肠病小鼠的肠黏膜免疫调节作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景:炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一组慢性非特异性肠道炎症性疾病,它包含两个疾病,克罗恩病(Crohn,s disease,CD)和溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC),其病因未明,且诊断和治疗颇为困难。用于治疗该病的传统药物具有花费昂贵,用药周期长,副反应较大,停药后易复发等缺点,甚至一部分经传统药物治疗效果不佳的IBD患者需转向外科行手术治疗。近年来随着人们对IBD发病机制及微生态制剂的深入研究,益生菌制剂逐渐运用于IBD患者的辅助治疗中,并取得一定疗效。目的:通过布拉氏酵母菌(Saccharomyces boulardii)作用于炎症性肠病小鼠,探讨布拉氏酵母菌对小鼠肠黏膜免疫调节的作用。方法:采用2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-Trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)诱导小鼠IBD模型,50只清洁级BALB/c小鼠,体重在18~22g左右,平均6~8周龄,雌雄各半,随机分为5组,每组10只:正常对照组(A组),模型组(B组),美沙拉嗪治疗组(C组),布拉氏酵母菌治疗组(D组),布拉氏酵母菌联合美沙拉嗪治疗组(E组)。各组小鼠均禁食,但不禁水24小时,B、C、D、E四组小鼠予以注入100mg/kg 5%TNBS(m/v)和无水乙醇等体积混合液,脉冲式注入后拔出灌肠管,迅速夹闭小鼠肛门,提起尾巴,使头朝下倒置约1分钟,目的促使造模药液与结肠黏膜充分接触,减少倒流量。A组予以灌入等量的生理盐水。造模结束后正常饲养,A、B两组予以生理盐水灌胃,其余各组按相对应药物灌胃治疗。每日观察小鼠一般状况、体重变化、大便性状及血便程度。7天后处死老鼠,收集结肠组织,一部分进行结肠组织石蜡切片,HE染色,观察镜下病理变化。另一部分进行肠组织匀浆,采用酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定肠道组织内白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)及γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)的表达。结果:一、造模结束后动物死亡9只,立即重新造模补充数据,在治疗过程中出现死亡动物,不予补充,不纳入数据。二、造模结束后A组小鼠活动正常,其余各组小鼠反应迟钝,皮毛松散,进食减少,体重下降。随着治疗的进行,C、D、E组小鼠症状改善,B组DAI分数为3.33±0.528、组织损伤大体评分为4.11±0.78、组织学评分为9.44±1.62、肠组织IFN-γ含量为371.83±14.37pg/ml,均高于其他四组,肠组织IL-10含量为62.41±7.96pg/ml,低于其余各组,差异有统计学意义(P0.01)。三、C、D两组各检测指标数值相差不大,差异无统计学意义(P0.05)。四、E组小鼠DAI分数为0.70±0.399、组织损伤大体评分为1.10±0.57、组织学评分为2.50±1.08、肠组织IFN-γ含量为194.23±16.45pg/ml,均低于B、C、D组,肠组织IL-10含量为100.84±4.305pg/ml,高于B、C、D组,差异有统计学意义(P0.01)。结论:1、TNBS诱导小鼠炎症性肠病模型基本成功,造模用时短,简单易操作。2、布拉氏酵母菌与美沙拉嗪在炎症性肠病的治疗中均有疗效,两组之间相比较无明显差异,治疗效果相当。3、美沙拉嗪联合布拉氏酵母菌治疗效果更佳,优于二者单独用药。4、布拉氏酵母菌可能是通过调节肠道免疫功能,控制炎症的进一步发展,进而改善症状。
【关键词】：布拉氏酵母菌 美沙拉嗪 炎症性肠病 白细胞介素-10 干扰素-γ
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R574.62
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-16
• 研究材料和方法16-26
• 1 实验材料16-17
• 1.1 实验动物16
• 1.2 实验器材16-17
• 1.3 试剂17
• 2 造模方法17-18
• 2.1 动物模型的制备及分组17-18
• 2.2 各组治疗药物剂量及配制18
• 3 观测的指标和方法18-24
• 3.1 一般情况及疾病活动指数DAI18-19
• 3.2 结肠大体形态评分19-20
• 3.3 组织学评分20-21
• 3.4 各组小鼠肠组织IFN-γ及IL-10的表达21-24
• 4 统计方法24-25
• 附技术路线图25-26
• 结果26-33
• 1 各组小鼠的一般状况26-27
• 2 各组小鼠的DAI评分结果27-28
• 3 大体形态损伤评分28-29
• 4 HE染色结果29-31
• 5 肠组织IFN-γ和IL-10的水平31-33
• 讨论33-43
• 1 IBD动物模型及评估33-36
• 2 微生态失衡与IBD的关系36-37
• 3 细胞因子与IBD的关系37-40
• 4 布拉氏酵母菌对IBD的治疗机制初步探讨40-41
• 5 课题来源41-42
• 6 本研究的不足之处42-43
• 结论43-44
• 参考文献44-49
• 综述49-60
• 参考文献55-60
• 作者简介及读研期间主要科研成果60-61
• 致谢61-62

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