敲除PEAK1破坏Src/FAK/Paxillin/Cortactin复合物维持的紧密连接加剧DSS诱发的小鼠肠炎

发布时间：2021-04-18 14:41

　　PEAK1是定位于细胞骨架actin等部位的非受体酪氨酸蛋白激酶,但是其对锚定在actin上的紧密连接以及紧密连接影响的溃疡性结肠炎的调控机制仍不清楚。我们在PEAK1基因敲除小鼠中没有观察到自发性肠炎表型,但是在硫酸葡聚糖钠诱导的溃疡性结肠炎模型中,经过体重、生存率、组织病理、炎症因子等方面评估,首次证实了缺失PEAK1基因会加剧肠炎。根据结肠组织转录组测序结果的提示,我们采用免疫印迹实验、免疫荧光实验、免疫共沉淀等方法,在小鼠原代肠上皮细胞和肠上皮细胞系NCM460中探究了缺失PEAK1加剧肠炎的潜在分子机制。实验结果表明,敲除PEAK1的肠炎小鼠结肠组织中促炎因子IL-6显著上升,敲除PEAK1后肠上皮细胞中REG3β升高,敲低PEAK1后STAT3 Y705磷酸化明显增加,因此我们提出解释表型的第一个假说:PEAK1的缺失解除了REG3β对STAT3信号通路的抑制效应,释放大量IL-6等炎症促进因子,从而加重肠炎。在重点开展的紧密连接相关实验中,敲除PEAK1显著减少了AJs蛋白ZO-1和occludin的表达而对粘附连接标志物E-cadherin影响很小。我们对NCM460细... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PEAK1基因敲除小鼠未观察到明显自发性肠炎表型Figure3.1SpontaneouscolitisisnotobservedinPEAK1deficiencymice.(A)IllsutrationofPEAK1knockoutworkmodelbyCRISPR/Cas9.(B)IdentificationofPEAK1knockout

重庆医科大学硕士研究生学位论文46图3.2PEAK1敲除小鼠对葡聚糖硫酸钠诱导的急性结肠炎更加敏感Figure3.2PEAK1deficiencymicearemoresusceptibletoDSS-inducedacutecolitis.(A)ChangeinweightofWTandPEAK1-/-miceovertimewereexpressedasthepercentageoftheinitialbodyweight(means±s.d.,n=6-12,Student’sttest,*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001).(B)Kaplan–MeiersurvivalcurveofDSStreatmentinPEAK1-/-miceandWTlittermates(n=6,log-ranktest,p=0.097).(C,D)ThecolonlengthofWTandPEAK1-/-mice

重庆医科大学硕士研究生学位论文49图3.3利用转录组测序分析结肠组织缺失PEAK1的差异基因表达谱Figure3.3Differentialgene-expressionprofilesofPEAK1/micecolondetectedbyRNAseqanalysis.(A)HeatmappresentationoffractionaldifferentialgenesforWTand

【参考文献】：
期刊论文
[1]Tight junctions in inflammatory bowel diseases and inflammatory bowel disease associated colorectal cancer[J]. Jonathan Landy,Emma Ronde,Nick English,Sue K Clark,Ailsa L Hart,Stella C Knight,Paul J Ciclitira,Hafid Omar Al-Hassi.  World Journal of Gastroenterology. 2016(11)
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本文编号：3145651