ssrAAV8-Kal对肝纤维化治疗作用的初探

发布时间：2017-04-20 18:04

  本文关键词：ssrAAV8-Kal对肝纤维化治疗作用的初探，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：肝纤维化为各种慢性肝病进一步发展并恶化的重要环节,若能在肝纤维化阶段消除致病因素并给与适当治疗,对于我国这一肝病大国意义十分重大。肝脏在纤维化过程中,普遍存在缺氧、炎症、氧化应激、门脉高压和血管增生等症状,因此有效的抗纤维化药物应该针对多靶点、多途径。目前此类药物大多数为重组蛋白,需反复给药,用药麻烦。临床医学研究表明持续稳定剂量给药比间断性峰值给药更为有效、副作用更低,而新兴的基因治疗技术恰能实现持续稳定的给药途径。本课题的研究目的是以本课题组已有一定研究基础的ssr AAV2-Kal作为对照,探究ssr AAV8-Kal这一基因药物对小鼠肝纤维化的疗效,分析2型与8型r AAV载体携带Kallistatin对肝纤维化的疗效的差别及对肝脏的靶向性和体内的稳定性。本论文研究对象为CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型,通过对小鼠的生长状态、肝脏外观、病理切片、肝功能指标、血清纤维化相关指标及肝组织中各项指标的检测与分析,着重探究了ssr AAV2-Kal和ssr AAV8-Kal两种基因药物在相同给药剂量和相同给药途径的情况下,对小鼠肝纤维化的疗效差别;并通过对各组小鼠在给药后血清中kallistatin表达经时关系及kallistatin组织分布情况的研究,初步探讨了ssr AAV8-Kal在肝纤维化治疗效果上优于ssr AAV2-Kal的原因。研究表明:在相同的给药剂量和给药方式的条件下,ssr AAV8-Kal对小鼠肝纤维化的疗效比ssr AAV2-Kal更明显(基于病理切片、血清指标、肝组织指标等检测与数据综合分析),多项指标趋于恢复正常水平;而ssr AAV8-Kal疗效更好的主要原因是ssr AAV8-Kal在体内的抗原清除率较ssr AAV2-Kal低,从而得以高效表达。研究结果表明ssr AAV8-Kal治疗组肝脏中kallistatin含量(8.0×104pg/m L)比ssr AAV2-Kal治疗组(7.9×105 pg/m L)高出约10倍,这是其对肝纤维化的疗效更佳的关键因素。本论文通过ssr AAV2-Kal和ssr AAV8-Kal对比研究,不但证实了ssr AAV8-Kallistatin在肝纤维化治疗中的有效性、便捷性及高效性,更进一步完善了临床前研究材料,为将ssr AAV8-Kallistatin推向临床提供了重要依据。
【关键词】：肝纤维化 基因治疗 ssr AAV8-Kallistatin
【学位授予单位】：华侨大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575.2
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 第1章 引言8-20
• 1.1 肝纤维化概述8-12
• 1.1.1 肝纤维化的发病机制8-9
• 1.1.2 肝纤维化的治疗现状9-12
• 1.2 腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)概述12-16
• 1.2.1 AAV的基因组结构13
• 1.2.2 AAV的血清型13
• 1.2.3 AAV的临床研究进展13-16
• 1.3 Kallistatin概述16-17
• 1.3.1 Kal的生物学特性16
• 1.3.2 Kal的功能及在疾病治疗中的应用16-17
• 1.4 课题来源与意义17-19
• 1.5 课题研究思路、特色与主要研究内容19-20
• 第2章 ssr AAV2、8-Kallistatin抗纤维化作用研究20-48
• 2.1 前言20
• 2.2 实验材料、试剂配制及主要仪器20-22
• 2.2.1 实验材料20-21
• 2.2.2 实验试剂配制21-22
• 2.2.3 实验仪器22
• 2.3 实验方法22-32
• 2.3.1 肝纤维化小鼠模型构建及给药22-23
• 2.3.2 小鼠血清样品的制备及保存23
• 2.3.3 小鼠各组织器官的制备及保存23
• 2.3.4 肝组织匀浆的制备23
• 2.3.5 石蜡标本的制备23-24
• 2.3.6 载玻片清洗及处理24
• 2.3.7 石蜡切片的制备24-25
• 2.3.8 肝组织苏木素伊红（HE）染色25
• 2.3.9 肝组织天狼猩红染色25-26
• 2.3.10肝组织Masson三色染色26-27
• 2.3.11谷丙转氨酶（ALT）测定27
• 2.3.12谷草转氨酶（AST）测定27-28
• 2.3.13总胆红素（TBIL）测定28
• 2.3.14小鼠透明质酸（HA）测定28-29
• 2.3.15小鼠层粘连蛋白（LN）测定29
• 2.3.16小鼠Ⅲ型胶原（C-Ⅲ）测定29
• 2.3.17小鼠Ⅳ型胶原（C-Ⅳ）测定29
• 2.3.18小鼠肝组织超氧化物歧化酶（SOD）测定29-30
• 2.3.19肝组织丙二醛（MDA）测定30-31
• 2.3.20小鼠肝组织羟脯氨酸（Hyp）测定（碱水解法）31-32
• 2.4 实验结果与分析32-46
• 2.4.1 肝纤维化小鼠模型的构建及给药32
• 2.4.2 小鼠肝脏外观32-34
• 2.4.3 肝组织切片HE染色34-35
• 2.4.4 肝组织切片苦味酸天狼猩红染色35-36
• 2.4.5 肝组织切片Masson三色染色36-37
• 2.4.6 肝功能指标（ALT、AST、TBIL）检测37-39
• 2.4.7 纤维化血清标志物（HA、LN、C-Ⅲ、C-Ⅳ）检测39-43
• 2.4.8 肝组织氧化指标（MDA、SOD）检测43-45
• 2.4.9 肝组织羟脯氨酸含量（Hyp）检测45-46
• 2.5 本章小结与讨论46-48
• 第3章 对ssr AAV2、8-Kallistatin表达经时关系及组织分布的研究48-57
• 3.1 前言48
• 3.2 实验材料、试剂配制及主要仪器48-49
• 3.2.1 实验材料48
• 3.2.2 实验试剂配制48-49
• 3.2.3 实验仪器49
• 3.3 实验方法49-50
• 3.3.1 各脏器组织匀浆的制备49
• 3.3.2 各样本Kallistatin含量的检测49-50
• 3.4 实验结果与分析50-56
• 3.4.1 各组小鼠血清中kallistatin表达的经时关系50-51
• 3.4.2 各组小鼠中kallistatin在各组织的分布51-53
• 3.4.3 各组小鼠各个组织中kallistatin浓度53-56
• 3.5 本章小结与讨论56-57
• 第4章 结论57-59
• 4.1 研究总结57
• 4.2 问题及展望57-58
• 4.3 需进一步开展的研究58-59
• 参考文献59-66
• 致谢66-67
• 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 赵长青;吴艺青;徐列明;;扶正化瘀胶囊抗肝纤维化的临床疗效和作用机制[J];中西医结合学报;2006年05期

2 姜慧卿;张晓岚;;肝纤维化的发生机制[J];世界华人消化杂志;2000年06期

3 杨宏志;陈琰碧;许瑞云;沈伟生;陈国庆;刘煜;;Clinical Observation on the Long-Term Therapeutic Effects of Traditional Chinese Medicine for Treatment of Liver Fibrosis[J];Journal of Traditional Chinese Medicine;2000年04期

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本文编号：319222