树鼩IFN-γ的克隆及原核表达系统的建立

发布时间：2021-07-01 13:28

　　目的1.克隆树鼩γ干扰素分子。2.建立树鼩γ干扰素原核表达系统。方法1．以树鼩PBMC cDNA为模板，用两对引物分别采用PCR法，扩增树鼩IFN-γCDS区序列2．构建树鼩IFN-γ-pRSETB原核表达载体，并将载体转入BL21（DE3） PlysS菌中，用IPTG诱导表达重组IFN-γ蛋白。结果1、以树鼩外周血单核细胞为模板，设计两对引物IFN-P1/IFNP3、IFN-P2/IFNP10，分别采用PCR扩增出IFN-γ片段为约344bp和476bp.将两段PCR产物测序结果综合，得到509bp核苷酸序列。将此序列与人类IFN-γ序列比对，证实树鼩与人类IFN-γ分子间具备较高同源性。2、将429bp IFN-γ编码区片段（不含信号肽序列）连接表达载体pRSET-B，测序结果证明载体构建成功。3、重组质粒IFN-γ-pRSETB在BL21（DE3） PlysS菌中经IPTG诱导，以包涵体形式表达。经westernblot分析，证实为约18KD的重组蛋白。结论1、成功克隆获得树鼩γ干扰素CDS区核苷酸序列。2、成功构建树鼩IFN-γ原核表达质粒IFN-γ-pRSETB，并且在BL2... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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Abstract
引言
材料与方法
结果
讨论
参考文献
综述
    参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]丙型肝炎病毒细胞和动物模型的研究进展[J]. 张立营,高博,冯玉奎.  生物技术通讯. 2011(02)
[2]干扰素的抗病毒作用及其临床应用[J]. 杨莉萍,曹素艳,邵宏.  国外医学(药学分册). 2004(02)



本文编号：3259221