靶向肝星状细胞PDGF-β受体小干扰RNA减轻大鼠肝纤维化

发布时间：2021-07-06 10:01

　　研究背景及目的肝纤维化是肝脏对不同病因所致的慢性损伤共有的过修复反应,其病理特征是肝脏细胞外基质（extracellular matrix,ECM）过度沉积及分布异常。肝星状细胞（hepaticstellate cell,HSC）是纤维化肝脏中产生ECM的最主要细胞,HSC的活化是肝纤维化发生的核心环节,设法抑制HSC激活、增殖与迁移是肝纤维化治疗的重要对策。血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor,PDGF）是最强的促进HSC增殖的细胞因子,由A、B、C、D四条高度同源的多肽链组成,其中A、B亚基互相组合可以表现为AA、BB、AB三种分子形式。PDGF受体（platelet-derived growthfactor receptor,PDGFR）由两种亚单位α及β构成,静止的HSC表面只有α亚单位,HSC活化后才表达β亚单位,而且以β亚单位为主,与PDGF-BB具有较强的亲和力。PDGF-BB以及PDGFR-β在肝纤维化过程中发挥重要作用,设法抑制PDGF及其受体表达,阻断PDGF细胞内信号转导是抗肝纤维化的治疗策略之一。RNA干扰（RNA i... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：97 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

siRNA对HscPDGFR一pmRNA和蛋白表达水平的影响

图1.3:siRNA对HSc增殖的影响图A为BrdU掺入结合细胞免疫荧光染色检测细胞增殖，其中蓝色荧光显示用DAPI标记细胞核以方便细胞计数，绿色荧光显示掺入BrdU的细胞的细胞核。图B为BrdU掺入结合流式细胞技术检测细胞增值，方框中显示的数字即为掺入BrdU的细胞占细胞总数的百分比。图C为A和B的统计图，二FAc，代表流式细胞计数，二lF’’代表细胞免疫荧光染色，“**”表示p<0.01。图D显示westemBlot检测对HSC进行不同处理对细胞内信号调节激酶(ERK)磷酸化的影响，‘·p098059’’是ERK的特异性抑制剂，作为阳性对照，、冲E既”指磷酸化的E既。图E是用RT-PcR检测不同处理对细胞内核转录因子c一fos基因表达的影响。BrdU掺入试验(无论是用细胞免疫荧光染色还是流式细胞术检测)显示HSC一T6

的小干扰RNA可以抑制HSC的增殖(图1.3A，B，C)。由于MAPK信号转导途径是PDGF传递细胞增殖信号的主要途径，我们检测了HSC内MAPK信号转导途径中的两个关键分子ERK和c一fos的表达。WestemBlot结果显示PDGF一BB刺激可以使Hse的ERK蛋白磷酸化水平提高约1.3倍咖<0.05)，转染siRNAcon对pDGF一BB的这种效应无明显影响(p>0.05)，而转染s识到A95:则可以使经PDGF一BB刺激的Hsc的ERK蛋白磷酸化水平降低约50%(p<0.05)。我们也发现PD98059可以使经PDGF一BB刺激的Hsc的ERK蛋白磷酸化水平降低约65%(p<0.01)(图1.3D)。RT-PCR检测显示PDGF一BB能明显提高。一fos的表达水平，且这种效应不受siRNAcon的影响，而转染siRNA95:后。fos的表达水平受到明显抑制(图1.3E)。ERK蛋白磷酸化是MAPK信号转导通路的重要中间过程，而MAPK信号转导通路正是通过促进核转录因子的转录促进细胞增殖的，说明阻断细胞内MAPK信号转导通路是siRNA957抑制PDGF一BB的促增殖效应的主要机制之一。四、针对PDGFR一p的小干扰RNA对HsC的凋亡无明显影响

【参考文献】：
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本文编号：3268032