大鼠肝脏缺血—再灌注中线粒体DNA损伤与修复机制的初步研究

发布时间：2017-04-30 21:01

  本文关键词：大鼠肝脏缺血—再灌注中线粒体DNA损伤与修复机制的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本课题针对临床上肝脏缺血-再灌注损伤(hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI)中线粒体DNA损伤与修复的机制进行初步研究,主要有如下几点:1、肝细胞线粒体DNA(mitochondrial DNA,mt DNA)损伤引起细胞凋亡的机制;2、mt DNA损伤的常见位点;3、线粒体聚合酶γ修复受损mt DNA的途径及靶点;4、雷帕霉素对线粒体的保护作用及机制。对上述问题从基因水平探讨mt DNA损伤在肝脏缺血-再灌注损伤中的作用,为肝脏缺血-再灌注损伤的治疗提供理论依据。方法:第一部分:肝脏缺血-再灌注中线粒体DNA损伤及修复的机制,建立大鼠全肝缺血-再灌注损伤模型,测定血清AST、ALT;取出肝脏作病理学检测;mt DNA D-loop区扩增测序,查找变异位点;RT-PCR检测肝组织内线粒体DNA聚合酶γm RNA的表达情况。第二部分:雷帕霉素在肝脏缺血-再灌注中对肝细胞线粒体的保护机制,建立大鼠全肝缺血-再灌注损伤模型,用雷帕霉素进行干预。提取肝组织蛋白,western blot检测细胞色素C蛋白表达水平;取肝脏组织行原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肝细胞凋亡。结果:第一部分:肝脏缺血-再灌注后早期(24h),大鼠血清AST、ALT均升高,肝组织病理学变化较重,线粒体DNA聚合酶γm RNA表达量均升高,其中雷帕霉素干预组AST、ALT及肝组织病理学改变和线粒体DNA聚合酶γm RNA表达量明显低于未给药组(p0.01);24h后血清AST、ALT均降低,为给药组线粒体DNA聚合酶γm RNA表达量逐渐降低,雷帕霉素干预组则较未给药组为低(p0.01)且术后一直维持在同一水平;雷帕霉素干预组mt DNA D-loop区DNA突变率明显低于未给药组(p0.01)。第二部分:肝脏缺血-再灌注后各时间点,大鼠肝脏细胞色素C表达水平均升高,其中雷帕霉素干预组细胞色素C的表达水平较未给药组为低(p0.01),24h后各组细胞色素C的表达水平逐渐降低,但各时间点雷帕霉素干预组细胞色素C的表达水平均较未给药组为低(p0.01)。各组各时间点检测肝细胞凋亡与细胞色素C表达水平的变化相同,即各时间点雷帕霉素干预组肝细胞凋亡水平均较未给药组为低(p0.01)。结论:(1)肝脏缺血-再灌注损伤中存在线粒体DNA突变,且突变率与缺血时间呈正相关,而雷帕霉素降低线粒体DNA突变率。(2)细胞在肝脏缺血-再灌注损伤的修复中线粒体DNA聚合酶γm RNA表达量升高,其表达水平与线粒体DNA损伤程度相一致,而雷帕霉素可以抑制HIRI中线粒体DNA聚合酶γm RNA的过度表达,更利于修复受损的线粒体DNA。(3)肝脏缺血-再灌注损伤使组织中细胞色素C表达水平升高、肝组织细胞凋亡,且随缺血时间的延长表达水平及细胞凋亡程度亦升高,表明肝脏缺血时间越长,肝细胞凋亡程度越重,(4)雷帕霉素对肝细胞有保护作用,能降低线粒体DNA突变率;抑制肝脏缺血-再灌注损伤中线粒体DNA聚合酶γm RNA的过度表达,更利于修复受损的线粒体DNA及减轻肝细胞凋亡,从而减轻缺血-再灌注中肝脏细胞的损伤程度。
【关键词】：缺血-再灌注损伤 线粒体DNA 能量代谢 细胞凋亡 雷帕霉素
【学位授予单位】：贵阳医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文略缩词表9-10
• 引言10-11
• 第一部分11-27
• 材料与方法11-19
• 结果19-25
• 讨论25-27
• 第二部分27-38
• 材料与方法27-35
• 结果35-37
• 讨论37-38
• 结论38-39
• 参考文献39-43
• 附录43-46
• 综述46-55
• 参考文献51-55
• 作者简历55-56
• 致谢56-57
• 学位论文数据集57

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 ;Biliary tract injury caused by different relative warm ischemia time in liver transplantation in rats[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2009年03期

2 王艳杰;邓雯;张鹏飞;;细胞色素C与细胞凋亡研究进展[J];动物医学进展;2012年07期

3 朱春丽;吴家清;申升;王健富;周结学;蒙善东;刘东;李炎;;雷帕霉素在肾脏缺血再灌注损伤中的作用[J];广东医学;2014年12期

4 褚薇薇;聂蕾;和新盈;闫爱丽;周伊;吴庚利;王殿华;;细胞色素c在后处理抗大鼠肠缺血-再灌注损伤细胞凋亡中的变化[J];生理学报;2010年02期

5 马佳;陈治文;梅传忠;杨清玲;王惠;;淋巴瘤组织中线粒体DNA突变的研究[J];华中科技大学学报(医学版);2010年02期

6 孙仁虎;曾志贵;甄忠广;明长生;;雷帕霉素对肝脏缺血再灌注损伤修复的影响[J];华中科技大学学报(医学版);2008年01期

7 关炳星;顾梅;;肝移植相关的缺血再灌注损伤[J];中国当代医药;2009年09期

8 陈广顺;司中洲;李杰群;李亭;齐海智;;雷帕霉素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用[J];西安交通大学学报(医学版);2014年01期

9 李冲;赵海芳;;抗凋亡策略在肝脏缺血再灌注损伤中的研究进展[J];医学研究杂志;2014年07期

10 丁一宗;李稻;;DNA聚合酶γ基因突变研究进展[J];医学综述;2012年03期

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本文编号：337557