TLR4在脂多糖诱导大鼠肝内胆管上皮细胞EMT中的作用研究
发布时间：2021-09-29 16:22
目的:探究胆总管内注射细菌脂多糖（LPS）在SD大鼠体内是否通过诱导Toll样受体4（TLR4）刺激肝内胆管上皮细胞（IBECs）发生上皮-间质转化（EMT）,并观察对TLR4下游核转录因子NF-κB及snail的影响及其可能的作用机制。方法:1.健康SPF级SD雄性大鼠32只,体重在270±10 g范围内,随机将其分为四组（n=8/组）,即假手术对照组:SH组、模型组:LPS组、TLR4 sh RNA+LPS组:KD组、阴性病毒对照+LPS组:NC组。2.KD组和NC组尾静脉分别注射腺病毒载体TLR4sh RNA和阴性对照病毒（1x109 PFU/只）;96 h后,LPS组、KD组和NC组分别经胆总管逆行注射1 mg/kg LPS,SH组经胆总管逆行注射生理盐水作为对照,于48 h后分离保存肝内胆管组织。3.苏木素伊红（HE）染色观察胆管上皮细胞的组织病理学变化;实时定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹试验（Western bolt）检测所取标本中上皮标记物E-cadherin、CK7,间质标记物N-cadherin、MMP-2和TLR4的m RNA和蛋白表...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
腺病毒载体TLR4shRNA转染至大鼠体内96h后，肝内胆管上皮细胞的转染情况(低倍镜100×).
遵义医学院硕士学位论文 唐世芳2 结果2.1 LPS 诱导肝内胆管组织胆管上皮细胞形态学改变HE 染色观察大鼠肝内胆管上皮细胞的形态学改变。如图 2 所示， SH 组大鼠肝内胆管上皮细胞呈柱状排列整齐、细胞间粘附紧密、细胞结构清晰完整、周围并无明显的炎性细胞浸润；LPS 组胆管壁增厚，胆管上皮细胞脱落，部分小胆管上皮细胞排列紊乱、疏松、胆管上皮细胞呈梭形改变（红箭头所示），管腔内有炎性细胞浸润。TLR4 shRNA+LPS 组中胆管细胞排列基本规则，胆管壁无明显增厚，少量胆管上皮细胞脱落，可发现周围仅有少量炎性细胞，为圆形或椭圆形，相比 LPS 感染组炎性表现明显减轻；NC shRNA+LPS 组中同样有小胆管上皮细胞呈梭形改变，细胞间粘附性减弱（红箭头所示）。
究 LPS 是否能诱导大鼠肝内胆管上皮细胞发生 EMT，CR 法检测肝内胆管上皮细胞特异性上皮标记物 E-cadherin 素方差分析，各组 E-cadherin 基因表达差异见表 7。如图 3 （SH 组）的 E-cadherin 基因表达水平明显降低； TLR4 shR、NC shRNA+LPS 组相比较， E-cadherin 基因表达明显升高LPS 组两组间的 E-cadherin 基因变化无明显差异；但同 SH 组 组中 E-cadherin 表达量仍有降低（P<0.01），说明可能存在MT。表 7 各组中 E-cadherin mRNA 表达量的比较（ x ±SEM）Table 7 E-cadherin mRNA expression in four groups（ x ±SEM）SH LPS TLR4 shRNA+LPS NC0.9146±0.04146 0.499±0.02729##0.7708±0.02946#0.50roup;#P<0.01vs LPS group;△P<0.01vs TLR4 shRNA+LPS group.
【参考文献】：
期刊论文
[1]Toll样受体4信号通路对脑缺血损伤影响的研究进展[J]. 杨雪华,王锐,陈立杰. 中国临床神经科学. 2016(04)
[2]上皮-间质转化与肝胆管结石病的研究进展[J]. 赵礼金,王芳. 世界华人消化杂志. 2016(08)
[3]肝胆管结石成因及分型[J]. 吕立升,魏妙艳,汤朝晖. 中国实用外科杂志. 2016(03)
[4]Hepatolithiasis and intrahepatic cholangiocarcinoma: A review[J]. Hyo Jung Kim,Jae Seon Kim,Moon Kyung Joo,Beom Jae Lee,Ji Hoon Kim,Jong Eun Yeon,Jong-Jae Park,Kwan Soo Byun,Young-Tae Bak. World Journal of Gastroenterology. 2015(48)
[5]Toll样受体4信号通路研究进展[J]. 蔡炳冈,朱进,汪茂荣. 医学研究生学报. 2015(11)
[6]Toll样受体靶向药物的研究进展[J]. 钟静静,万岩岩,刁昱文,刘兵,王竹林,靳广毅,高宁宁. 生命科学. 2015(04)
[7]胃癌术后胆石症发病相关因素的Meta分析[J]. 周徽,彭健. 中华肝胆外科杂志. 2015 (02)
[8]TLR4及其作用的研究进展[J]. 易世杰,赵礼金. 蛇志. 2013(02)
[9]LPS刺激SD大鼠胆管上皮细胞表型转化的动物实验研究[J]. 王麦建,杨雪峰,周廷梅,余得刚,江燕,王曙光,赵礼金. 重庆医科大学学报. 2010(11)
[10]重症急性胰腺炎病人的肠黏膜屏障功能障碍[J]. 丁凯,李维勤. 肠外与肠内营养. 2008(06)
硕士论文
[1]LPS通过激活TLR4诱导人肝内胆管上皮细胞上皮—间质转化[D]. 王芳.遵义医学院 2016
[2]TLR4-snail信号通路在LPS诱导的人胆管上皮细胞EMT中作用初步研究[D]. 顾进.遵义医学院 2015
[3]LPS诱导胆管上皮细胞Toll样受体4及上皮—间叶样表型转化相关标志物表达变化的实验研究[D]. 梁垲.遵义医学院 2013
本文编号：3414039
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
腺病毒载体TLR4shRNA转染至大鼠体内96h后，肝内胆管上皮细胞的转染情况(低倍镜100×).
遵义医学院硕士学位论文 唐世芳2 结果2.1 LPS 诱导肝内胆管组织胆管上皮细胞形态学改变HE 染色观察大鼠肝内胆管上皮细胞的形态学改变。如图 2 所示， SH 组大鼠肝内胆管上皮细胞呈柱状排列整齐、细胞间粘附紧密、细胞结构清晰完整、周围并无明显的炎性细胞浸润；LPS 组胆管壁增厚，胆管上皮细胞脱落，部分小胆管上皮细胞排列紊乱、疏松、胆管上皮细胞呈梭形改变（红箭头所示），管腔内有炎性细胞浸润。TLR4 shRNA+LPS 组中胆管细胞排列基本规则，胆管壁无明显增厚，少量胆管上皮细胞脱落，可发现周围仅有少量炎性细胞，为圆形或椭圆形，相比 LPS 感染组炎性表现明显减轻；NC shRNA+LPS 组中同样有小胆管上皮细胞呈梭形改变，细胞间粘附性减弱（红箭头所示）。
究 LPS 是否能诱导大鼠肝内胆管上皮细胞发生 EMT，CR 法检测肝内胆管上皮细胞特异性上皮标记物 E-cadherin 素方差分析，各组 E-cadherin 基因表达差异见表 7。如图 3 （SH 组）的 E-cadherin 基因表达水平明显降低； TLR4 shR、NC shRNA+LPS 组相比较， E-cadherin 基因表达明显升高LPS 组两组间的 E-cadherin 基因变化无明显差异；但同 SH 组 组中 E-cadherin 表达量仍有降低（P<0.01），说明可能存在MT。表 7 各组中 E-cadherin mRNA 表达量的比较（ x ±SEM）Table 7 E-cadherin mRNA expression in four groups（ x ±SEM）SH LPS TLR4 shRNA+LPS NC0.9146±0.04146 0.499±0.02729##0.7708±0.02946#0.50roup;#P<0.01vs LPS group;△P<0.01vs TLR4 shRNA+LPS group.
【参考文献】：
期刊论文
[1]Toll样受体4信号通路对脑缺血损伤影响的研究进展[J]. 杨雪华,王锐,陈立杰. 中国临床神经科学. 2016(04)
[2]上皮-间质转化与肝胆管结石病的研究进展[J]. 赵礼金,王芳. 世界华人消化杂志. 2016(08)
[3]肝胆管结石成因及分型[J]. 吕立升,魏妙艳,汤朝晖. 中国实用外科杂志. 2016(03)
[4]Hepatolithiasis and intrahepatic cholangiocarcinoma: A review[J]. Hyo Jung Kim,Jae Seon Kim,Moon Kyung Joo,Beom Jae Lee,Ji Hoon Kim,Jong Eun Yeon,Jong-Jae Park,Kwan Soo Byun,Young-Tae Bak. World Journal of Gastroenterology. 2015(48)
[5]Toll样受体4信号通路研究进展[J]. 蔡炳冈,朱进,汪茂荣. 医学研究生学报. 2015(11)
[6]Toll样受体靶向药物的研究进展[J]. 钟静静,万岩岩,刁昱文,刘兵,王竹林,靳广毅,高宁宁. 生命科学. 2015(04)
[7]胃癌术后胆石症发病相关因素的Meta分析[J]. 周徽,彭健. 中华肝胆外科杂志. 2015 (02)
[8]TLR4及其作用的研究进展[J]. 易世杰,赵礼金. 蛇志. 2013(02)
[9]LPS刺激SD大鼠胆管上皮细胞表型转化的动物实验研究[J]. 王麦建,杨雪峰,周廷梅,余得刚,江燕,王曙光,赵礼金. 重庆医科大学学报. 2010(11)
[10]重症急性胰腺炎病人的肠黏膜屏障功能障碍[J]. 丁凯,李维勤. 肠外与肠内营养. 2008(06)
硕士论文
[1]LPS通过激活TLR4诱导人肝内胆管上皮细胞上皮—间质转化[D]. 王芳.遵义医学院 2016
[2]TLR4-snail信号通路在LPS诱导的人胆管上皮细胞EMT中作用初步研究[D]. 顾进.遵义医学院 2015
[3]LPS诱导胆管上皮细胞Toll样受体4及上皮—间叶样表型转化相关标志物表达变化的实验研究[D]. 梁垲.遵义医学院 2013
本文编号：3414039
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